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1. 유세포 분석 및 림프구 아형 분류
참고: 세포 유형에 따라 림프구를 정렬하는 것은 지도 학습에서 세포 유형 분류기를 훈련하고 테스트하기 위한 실측 자료(즉, 올바른) 세포 유형 레이블을 설정하는 데 필수적입니다. 황금 표준 방법인 유세포 분석법은 림프구를 식별하고 분리하는 데 사용됩니다.
- B, CD4+ T 및 CD8+ T 림프구를 표적으로 하기 위해 100μg의 새로운 RPMI-1640 배지[10% FBS, 0.1μg의 CD3e(17A2), CD8a(53-6.7), CD19(1D3), CD45R(B220, RA3-6B2) 및 NK1.1(PK136) 포함] 및 0.25μg의 CD4(GK1.5) 항체에 표면 마커 염색 항체를 혼합합니다.
- 항체 혼합물 100μL를 세포 현탁액에 추가합니다.
- 얼음 위에서 25분 동안 배양합니다.
- PBS 5mL를 첨가하고 400 x g에서 4°C에서 5분 동안 2회 원심분리하여 세포를 세척합니다.
- 10% FBS 및 2.5μg의 DAPI(4',6-디아미디노-2-페닐린돌)가 포함된 5mL의 새로운 RPMI-1640 배지에 세....