림프구 아형(Lymphocyte subtype)을 특성화하기 위한 3차원 정량적 위상 이미징(Three-Dimensional Quantitative Phase Imaging)

초록

출처: Yoon, J. et al. Label-Free Identification of Lymphocyte subtypes Using Three-Dimensional Quantitative Phase Imaging and Machine Learning. J. Vis. 특급.(2018년)

이 비디오는 3D 정량적 위상 이미징을 통해 림프구 형태 및 생화학을 표지 없이 식별하는 방법을 보여줍니다. 이 기술을 사용하면 림프구를 철저히 분석하여 라벨링 절차 없이 림프구의 내부 구조와 특성을 밝힐 수 있습니다.

프로토콜

1. 유세포 분석 및 림프구 아형 분류

참고: 세포 유형에 따라 림프구를 정렬하는 것은 지도 학습에서 세포 유형 분류기를 훈련하고 테스트하기 위한 실측 자료(즉, 올바른) 세포 유형 레이블을 설정하는 데 필수적입니다. 황금 표준 방법인 유세포 분석법은 림프구를 식별하고 분리하는 데 사용됩니다.

1. B, CD4⁺ T 및 CD8⁺ T 림프구를 표적으로 하기 위해 100μg의 새로운 RPMI-1640 배지[10% FBS, 0.1μg의 CD3e(17A2), CD8a(53-6.7), CD19(1D3), CD45R(B220, RA3-6B2) 및 NK1.1(PK136) 포함] 및 0.25μg의 CD4(GK1.5) 항체에 표면 마커 염색 항체를 혼합합니다.
2. 항체 혼합물 100μL를 세포 현탁액에 추가합니다.
3. 얼음 위에서 25분 동안 배양합니다.
4. PBS 5mL를 첨가하고 400 x g에서 4°C에서 5분 동안 2회 원심분리하여 세포를 세척합니다.
5. 10% FBS 및 2.5μg의 DAPI(4',6-디아미디노-2-페닐린돌)가 포함된 5mL의 새로운 RPMI-1640 배지에 세....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
유세포 분석	BD 바이오사이언스	아리아 II 또는 III
이미징 챔버	주식회사 토모큐브	토모디쉬
홀로모그래피	토모큐브, Inc	하트-1H
홀로토모그래피 이미징 소프트웨어	주식회사 토모큐브	토모스튜디오
이미지 처리 소프트웨어	매스웍스	매트랩 R2017b
Falcon 원추형 원심분리기 튜브	써모피셔 사이언티픽	14-959-53ᅡ	15 밀리리터
인산염 완충 식염수	시그마-알드리치	806544-500ML
암모늄-염화물-칼륨 용해 완충액	써모피셔 사이언티픽	A1049201
RPMI-1640 배지	시그마-알드리치	R8758
소 태아 세럼	써모피셔 사이언티픽	10438018