출처: Fouda, A., et al., 저분자의 고처리량 스크리닝에 적합한 형광 기반 림프구 분석. J. Vis. 특급, (2017).
이 동영상은 형광 기반 분석을 통한 면역 조절 화합물의 스크리닝을 보여줍니다. 녹색 형광 단백질 발현 카세트를 가진 형질전환 마우스 유래 T 림프구는 이러한 화합물로 처리됩니다. 향상된 GFP 신호와 감소된 GFP 신호를 통해 화합물의 자극 및 억제 효과를 각각 식별할 수 있습니다.
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방법 논문
면역조절 화합물 스크리닝을 위해 엔지니어링된 림프구를 사용한 형광 기반 분석
957 조회수
⸱
2025년 7월 8일
이 논문에서
초록
프로토콜
1. 비장세포 배지 및 유세포 분석 완충액의 제조
- 70% 에탄올로 세척된 생물학적 후드 아래에서 모든 단계를 수행하십시오.
- 예열된 RPMI(Roswell Park Memorial Institute) 1640 1x 배지 70mL(시판 가능하며 여과된 500ml 용량 멸균 병으로 제공됨)를 제거하고 멸균 튜브에 넣습니다. 제거된 매체는 나중에 프로토콜에서 사용됩니다.
- 나머지 RPMI 1640 1x 430mL에 50ml 불활성화 소 태아 혈청(FBS), 5mL 페니실린/스트렙토마이신, 5mL N-2-하이드록시에틸피페라진-N-2-에탄 설폰산(HEPES), 5ml 비필수 아미노산, 5mL 피루브산 나트륨 및 0.05mL 여과(1M) 2-메르캅토에탄올을 추가합니다.
메모: 열 충격을 주는 세포를 피하기 위해 37ºC로 설정된 수조를 사용하여 비장 세포 배지를 예열합니다. 이것은 세포 자멸사 유도를 피하는 데 중요합니다. - 유세포 분석 완충액을 준비하려면 98ml 인산염 완충 식염수(PBS)에 FBS 2mL를 추가하고 사용할 때까지(바람직하게는 3일 이내) 냉장 보관합니다.
2. Nur7....
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공개 사항
선언된 이해 상충이 없습니다.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Nur77GFP 마우스 | 잭슨 연구소 | 마우스 변형 번호 016617 | 우리 동물 시설에 사내 식민지가 설립되었습니다 |
| 96웰-U 배양 플레이트, 멸균 | VWR 국제공항 | 제10062-902 | 마그네틱 비드를 이용한 T-세포 활성화 |
| 70μm 세포 여과기, 멸균 | 코닝 Inc. | 352350 | 비장세포 세포 현탁액의 생성 |
| 5ml 폴리스티렌 원형 바닥 튜브, 멸균 | 코닝 Inc. | 352058 | 비장세포 세포 현탁액의 생성 |
| 50ml 폴리프로필렌 원추형 바닥 튜브, 멸균 | VWR 국제공항 | 89039-656 | 비장세포 세포 현탁액의 생성 |
| 바늘 없는 10ml 주사기, 멸균 | Becton, 디킨슨 앤 컴퍼니 | 305482 | 비장을 으깨기 위해 |
| 멸균 세포 배양 접시 5ml | Greiner 바이오 원 | 627 160 | 비장을 으깨기 위해 |
| 페니실린- 스트렙토마이신(10,000 U/mL) | (주)위센트 | 450-200-엘 | 비장세포 배지의 구성 요소 |
| RPMI 1600 중탄산나트륨 및 L-글루타민 | (주)위센트 | Tel.: 350-002-CL | 비장세포 배지의 구성 요소 |
| MEM 비필수 아미노산 | (주)위센트 | 321-010-엘 | 비장세포 배지의 구성 요소 |
| HEPES 유리산 1M | (주)위센트 | Tel.: 330-050-EL | 비장세포 배지의 구성 요소 |
| 나트륨 피루브산 용액 (100mM) | (주)위센트 | 600-110-엘 | 비장세포 배지의 구성 요소 |
| 소 태아 세럼(FBS) | (주)위센트 | TEL.080-910 | 비장세포 배지 및 유세포 분석 완충액의 구성 요소 |
| 인산염 완충 식염수(PBS) | (주)위센트 | Tel.: 311-010-CL | flow-cytometry buffer의 구성 요소 |
| 2-메르캅토에탄올 (55mM) | 써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific | 21985-023 | 비장세포 배지의 구성 요소 |
| T- 세포 분리 키트 | 스템셀 기술 | 19851 | T 세포를 분리하기 위해 |
| 마우스 T-Activator CD3/CD28 초상자성 비드 | 써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific | 11452D | T 세포를 활성화하기 위해 |
| 세포 분리 자석 | 스템셀 기술 | 18000 | T 세포를 분리하고 자성 비드를 제거하기 위해 |
| 재조합 쥐 IL-7 | 페프로텍 | 217-17 | 활성화 중 T 세포 생존을 지원하기 위해 |
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| 바이오메드 FXp | 퍼킨엘머 주식회사 | A31842 | 24시간 배양 후 세포를 다시 현탁시키기 위해 |
| Opera Phoenix High Content 스크리닝 시스템 | 퍼킨엘머 주식회사 | HH14000000 | GFP/Hoechst 신호 분석 |
