Mycobacterial Extracellular Vesicles를 정제하기 위한 크기 배제 크로마토그래피 기술

초록

출처: Ryan, J. M., et al. Mycobacterium tuberculosis 크기 배제 크로마토그래피를 통한 세포외 소포 농축. J. Vis. 특급 (2022).

이 동영상은 결핵균(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)의 배양 여과액에서 박테리아 세포외 소포체(EV)를 정제하기 위한 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 기술을 보여줍니다. 이 기술은 다공성 수지 충전 컬럼을 사용하여 EV의 정제된 분획을 얻습니다. 다공성 입자는 더 작은 단백질이 기공으로 들어가도록 선택적으로 허용하여 용리 속도를 늦춥니다. 동시에 EV는 크기가 크기 때문에 모공으로 들어가는 것이 배제되고 먼저 용출됩니다.

프로토콜

1. Mtb EV 원유 농축액 제조

참고: Mtb 배양 및 배양 여과액 단백질(CFP) 준비에 대한 자세한 절차는 참고 문헌을 참조하십시오. 박테리아 배양 배지에는 올레산 알부민 포도당 카탈라아제(OADC)와 같은 EV 함유 또는 단백질 성분이 포함된 성장 보충제 및 Tween과 같은 세제가 없는 것이 좋습니다. 또한 박테리아 배양의 품질과 수확된 CFP를 스크리닝하여 세포 사멸 및 용해를 제한하는 것이 좋습니다.

1. 인산염 완충 식염수(1x PBS)의 전체 부피를 추가하여 100kDa 분자량 컷오프(MWCO) 원심 필터(재료 표 참조)를 준비합니다. 4°C에서 2,800 x g에서 5분 동안 원심분리기.
   메모: 데드 스톱 부피가 없는 필터를 사용하는 경우, 시료 부피가 필터 수준 이하로 감소하여 원심분리 중에 필터가 완전히 건조되지 않도록 주의해야 합니다.
2. 시료 챔버에 Mtb CFP를 최대 용량까지 채우기 전에 관류와 남은 PBS를 폐기하십시오. 부피가 한외여과 장치의 최소 부피로 감소할 때까지 4°C에서 2,800 x g에서 원심분리기. 필....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
96웰 플레이트	코 닝	제15705-066
자동 분획 분취기(Automatic Fraction Collector	아이존 사이언스	AFC-V1-미국 달러
탁상용 원심분리기	벡크만 쿨터	알레그라 6R
Centricon Plus - 70 원심분리 필터, 100 kDa 컷오프	밀리포어 시그마	UFC710008	1.1단계에서 사용된 한외여과 장치
인산염 완충 식염수, 칼슘 및 마그네슘 없는 1X	코 닝	21-040-이력서
Pierce BCA 단백질 분석 키트	써모피셔 사이언티픽	23225
qEV 오리지널 35nm 5/pk	아이존 사이언스	SP5-USD	SEC 칼럼

호 ) 년