인간 식세포에 의한 Fungal Spore Phagocytosis의 정량적 유세포 분석 측정

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초록

이 비디오는 인간 백혈구에 의한 FITC 표지 병원성 진균 포자의 식세포작용을 정량화하는 방법을 보여줍니다. 식세포작용된 포자는 counterstaining을 통해 세포 부착 포자에서 식별한 후 유세포 분석을 수행합니다.

프로토콜

검체 채취와 관련된 모든 절차는 연구소의 IRB 지침에 따라 수행되었습니다.

1. 식세포작용 분석

12웰 세포 배양 플레이트에서 1.5mL의 RPMI + 10% FCS에 2 x 10⁶ 백혈구 및 4 x 10⁶ FITC 표지 분생포자(감염 다중성 = 2)를 배양합니다. 대조군으로는 세포만(분생포자 없음) 및 세포 + 레이블이 지정되지 않은 분생포자(conidia)를 포함합니다.
37°C의 가습된 CO₂ 인큐베이터에 넣고 원하는 시간(예: 0.5시간, 2시간 또는 4시간) 동안 배양합니다.
배양 후 세포 스크레이퍼로 세포를 채취하고 15mL 튜브에 넣습니다.
실온에서 300 x g에서 5분 동안 회전합니다.
사이토카인 분석을 위해 상층액을 수집하거나 원하지 않는 경우 폐기합니다. 100μL의 PBS + 2mM EDTA에서 각 샘플을 재현탁합니다.

2. 항체 염색

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름	회사	카탈로그 번호	댓글
접착 호일	낙인	701367
세포 배양 플레이트, 12웰	그라이너 바이오 원	665180
세포분석기	BD 바이오사이언스		LSR Fortessa II, 레이저: 488nm(파란색), 405nm(보라색), 355nm(UV) 및 640nm(빨간색)
에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)	시그마 알드리치	ED3SS-500g	PBS에서 2mM
플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC)	시그마 알드리치	F3651-100MG	Na₂CO₃ /PBS 용액에서 0.1mM
인산염 완충 식염수(PBS)	써모피셔 사이언티픽	189012-014	칼슘 없이, 마그네슘 없이
RPMI 1640	써모피셔 사이언티픽	61870010	RPMI 1640 배지, 글루타맥스 보충제
데이터 수집 및 분석을 위한 소프트웨어	BD 바이오사이언스
V-바닥 플레이트, 96웰	낙인	781601	처리되지 않은 표면
포름알데히드	칼 로스	PO87.3	히스토픽스

년 년

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