묘목 성장의 면역 유도 억제 측정

초록

출처: Bredow, M. et al., 애기장대 thaliana의 패턴 트리거 산화 버스트 및 묘목 성장 억제 분석. J. Vis. 특급 (147),(2019).

이 비디오는 애기장대 탈리아나 식물의 묘목 성장 억제 분석을 보여줍니다. 면역 펩타이드 유도체의 농도 증가가 묘목 성장에 미치는 영향이 결정됩니다.

프로토콜

1. 묘목 성장 억제 분석

1. 씨앗을 살균하고 Murashige 및 Skoog (MS) 접시에 파종합니다.
   1. 0.8% 한천[w/v]을 포함하는 멸균 절반 강도(0.5x) MS 배지(2.16g/L)를 준비합니다. 층류 후드의 플레이트(90 x 15mm)에 매체를 붓습니다.
   2. 마이크로 원심분리기 튜브에 약 100개의 씨앗을 1mL의 70% 에탄올로 2분 동안 세척하여 살균하고 흡인으로 제거합니다. 40% 표백제 1mL를 넣고 실온에서 17분 동안 부드럽게 흔들어줍니다. 흡인으로 표백제를 제거하고 멸균수 1mL에 5분 동안 3회 세척합니다. 멸균 0.1% 한천 1mL에 재현탁
      메모: 또는 염소 가스 종자 멸균 프로토콜24을 사용합니다.
   3. 피펫을 사용하여 MS 한천 플레이트에 유전자형당 약 100개의 씨앗을 파종하고 층류 후드에 미세 기공 테이프로 밀봉합니다.
      메모: 씨앗을 가까이 두면 나중에 묘목을 이식하기가 어려워질 수 있으므로 가까이 두지 마십시오.
   4. 발아를 동기화하기 위해 3-4일 동안 플레이트를 4°C(빛 없음)에 배치하여 종자를 층화합니다(그림 1A).

결과

그림 1. 애기장대에서 Elicitor-induced seedling growth inhibition assay(애기장대에서 Elicitor-induced seedling growth inhibition assay). (A) MS 한천에 묘목을 파종하고 표준 단일 조건에서 3-4 일 동안 자랍니다. (B) MS 배지 또는 다른 농도의 elf18을 함유하는 MS를 포함하는 48웰 플레이트에 묘목을 이식합니다. (C) 8-12일 후, 묘목 크기를 육안으로 평가한 다음 분석 저울을 사용하여 새로운 무게를 측정하여 성장 억제 비율을 결정합니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
뚜껑이 있는 8웰 멸균 플레이트	시그마-알드리치	CLS3548
Draft Sheid를 사용한 분석 저울	폭스바겐	폭스바겐-225AC	모든 표준 분석 스케일을 성장 감지 분석에 사용할 수 있지만 직접 컴퓨터 출력이 최적입니다.
BioHit mLine 기계식 12 멀티채널 피펫 (30-300 uL	싸토리우스	725240	모든 멀티채널 피펫을 사용할 수 있으며 필요한 경우 단일 피펫터를 사용할 수 있습니다.
elf18 (AcSKEKFERTKPHVNVGTIG)	EZ 바이오랩	CP7211	-80°C에서 10mM 스톡 펩타이드를 저단백질 결합 튜브에 보관하십시오. 해동되면 -20°C에서 100uM 작업 재고를 보관하십시오.
Murisage와 Skoog 기초 소금	Cedarlane 연구소	MSP09-100LT	4°C에서 보관하십시오.
백색 폴리스티렌 96웰 플레이트	피셔 사이언티픽	전화: 07-200-589