마이코박테리아에 대한 테스트 화합물 활성을 평가하기 위한 Charcoal Agar Resazurin 분석

초록

출처: Gold, B. et al., 마이코박테리아의 반정량, 중간 처리량 계수를 위한 Charcoal Agar Resazurin Assay의 시각화. J. Vis. 특급 (2016)

이 비디오는 Mycobacterium tuberculosis에 대한 항균 화합물의 활성을 평가하기 위한 CARA(Charcoal Agar Resazurin Assay)를 보여줍니다. CARA는 박테리아 성장에 미치는 영향을 측정하고 살균 효과와 정균 효과를 구별하여 이러한 화합물의 효능을 평가하는 데 도움이 됩니다.

프로토콜

1. MIC₉₀ Assay 복제 및 비복제

설정

1. 0.01-0.1의 OD₅₈₀에서 M. tuberculosis, M. bovis BCG 또는 M. smegmatis를 접종하고 Middlebrook 7H9-ADN(0.2% 글리세롤, 0.2% 포도당, 0.5% 알부민 및 0.085% NaCl을 함유하는 Middlebrook 7H9) 또는 7H9-OADC(0.2% 글리세롤 및 10% OADC 보충제를 함유하는 Middlebrook 7H9)에서 중간 로그상(OD₅₈₀ ~0.5)으로 확장.
2. M. tuberculosis 및 M. bovis BCG를 세포 배양 플라스크에서 ~20ml 상설 배양으로 성장시키고 폴리프로필렌 둥근 바닥(4ml 배양) 또는 50ml 원추형 원심분리기 튜브(10-20ml 배양)에서 진탕하여 M. smegmatis를 성장시킵니다. 병원성 마이코박테리아를 37°C에서 20%_O2 및 5% CO₂로 배양하고 M. smegmatis를 37°C에서 20%_O2로 배양합니다.
3. 복제 ....

결과

그림 1: 예상 결과와 함께 배물 MIC₉₀ 분석 및 CARA의 개략도. MIC₉₀ 및 CARA 결과는 모두 8가지 가능한 활동에 대해 제시됩니다. MIC₉₀ 마이크로플레이트 웰의 색상 코딩은 흰색(성장 없음) 및 갈색(성장)이며, CARA 마이크로플레이트의 색상 코딩은 검은색(형광 없음) 및 분홍색(레소루핀 형광)입니다. 데이터는 가설입니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
미들브룩 7H9	벡턴 디킨슨	271310
미들브룩 7H11	벡턴 디킨슨	제298810
미들브룩 OADC	벡턴 디킨슨	212351
BSA, 열충격	로슈	3118958001
활성탄	시그마
PBS, Dulbecco의 Ca2+ 및 Mg2+ 무료	생명 기술 / Invitrogen	14190-144
트윈 80	시그마	P8074
리팜피신	시그마	R3501
6- 브로 모 -1H- 인다 졸 -3- 아민	알파 에자르	H34095
인산칼륨 일염기성	시그마	P0662
황산마그네슘, 헵타하이드레이트	시그마	M1880
구연산 철 암모늄	시그마	F5879
황산아연, 헵타하이드레이트	시그마	Z0251
염화암모늄	시그마	A9434
부티르산, 액체	시그마	B103500
레사주린 분말	시그마	R7017
소금	J.T. 베이커	4058-01
레사주린 용액 제조	인비트로젠	DAL1100
분광 광도계	분자 장치	M5
96-well, 조직 배양 처리된 마이크로플레이트	코 닝	3595
시약 저장탱크	폭스바겐	89094-678
재밀봉 가능한 비닐 봉지	폭스바겐	Tel.: 395-94602
14 mL 폴리프로필렌 라운드 튜브	코 닝	352059
50 mL 코니컬 원심분리기 튜브	코 닝	352070
75cm2 세포 배양 플라스크	코 닝	431464U

호 년 (영문) (영문) 년 년