박테리오신 생산 쥐 분변 세균 분리체의 항균 잠재력 평가

초록

출처: Bäuerl, C., et al. 쥐의 장내 미생물총(microbiota)에 대한 박테리오신 효과를 평가하는 방법. J. Vis. 특급 (2017).

이 비디오는 쥐의 배설물에서 유래한 박테리오신 생성 유산균의 검출을 보여줍니다. 이 분석은 특정 박테리아 균주에 대한 박테리오신의 항균 활성을 측정합니다.

프로토콜

1. LAB 계수 및 박테리오신 활성

1. 1.5mL 튜브에 각 샘플의 배설물 펠릿 1개를 넣고 얼음처럼 차가운 0.9% NaCl을 적당량 첨가하여 10%(w/v) 용액을 만듭니다. 1.5mL 튜브에 멸균 마이크로 유봉을 사용하여 대변 현탁액을 균질화하고 얼음처럼 차가운 0.9% NaCl에서 10배 연속 희석액을 준비합니다.
2. LAB 셀의 총 수를 계산합니다.
   1. 희석된 세포(100 μL)를 예열된 MRS(Man Rogosa Sharpe) 연질 한천(50 °C, 0.8% 한천) 4mL로 이동합니다. 단단한 MRS 한천 플레이트(1.5% 한천)에 세포를 붓기 전에 볼텍싱으로 혼합합니다.
   2. 멸균 후드에서 뚜껑을 5 - 10분 동안 열어 플레이트를 건조시킨 후 세포 성장 및 집락 형성을 위해 30°C에서 20 - 24시간 동안 세포를 배양합니다.
3. 박테리오신 생산 세포를 세십시오.
   1. 박테리오신 생산자의 희석된 세포(100μL)를 예열된 MRS 연질 한천(50°C, 0.8% 한천) 4mL로 옮기고, 와류로 혼합한 후 세포를 MRS 한천 플레이트(1.5% 한천)에 붓는다. 이 층을 제1 층이라고 한다.
   2. cell-free MRS soft agar(0.8% 한천) 4mL를 첫 번째 레이어에 옮겨 soft agar.
      내의 모든 세포를 삽입합니다. 메모: 이 층은 세포가 한천 판의 표면에서 식민지로 성장하는 것을 방지하기위한 것입니다. 지표 셀을 상단에 붓을 때(단계 4.3.4) 표면에서 자라는 세포는 쉽게 이동하므로 결과 해석이 복잡해집니다. 이 계층을 두 번째 계층이라고 합니다.
   3. 멸균 후드에서 뚜껑을 열어 플레이트를 5 - 10분 동안 건조시킨 후 세포 성장 및 집락 형성을 위해 30°C에서 20 - 24시간 동안 배양합니다.
   4. 박테리오신 생성 콜로니를 식별하려면 적절한 지표 균주의 하룻밤 배양물 40μL를 예열된 부드러운 한천 4mL와 혼합합니다. 혼합물을 접시에 붓습니다. 이 계층을 세 번째 계층이라고 합니다.
   5. 멸균 후드에서 뚜껑을 5 - 10분 동안 열어 플레이트를 건조시킨 후 세포 성장 및 집락 형성을 위해 30°C에서 20 - 24시간 동안 배양합니다.
      메모: 박테리오신 생산 군체는 군체 주변에 명확한(억제) 구역을 가지고 있습니다(그림 1).

결과

그림 1: 3층 프로토콜에 의해 대변에서 회수된 LAB에서 박테리오신 생산 검출(절차에 설명된 대로)

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
플라스틱 페트리 접시	써모 사이언티픽(Thermo Scientific	101VR20
Brain-Heart-Infusion 육수	콘다	1400
유럽 세균 한천	프로나디사	1800
아가로스 D1 낮은 EEO	프로나디사	8010
1x TAE 버퍼	써모 사이언티픽(Thermo Scientific	15558042
MRS 육수	디프코	288130
PBS 정제	시그마	P4417-100탭
저울	메틀러 톨레도	PB602-에스

) 시리즈 년 년 년 )