광견병 바이러스 항원 검출을 위한 면역조직화학 염색

초록

출처: Niezgoda, M. et al., 포르말린 고정 조직에서 리사바이러스 항원 검출을 위한 면역조직화학 검사. J. Vis. 특급 (2021)

이 비디오는 감염된 쥐의 뇌 조직에서 광견병 바이러스 항원 검출을 위한 면역조직화학 염색을 보여줍니다. 이 과정에는 탈파라핀화(deparaffinization) 및 알코올 처리(alcohol treatment)가 포함되며, 항원 접근성을 높이기 위한 단백질 분해 처리(proteolytic treatment)가 이어집니다. 면역조직화학 염색을 통해 붉은 침전물이 나타나 조직 단면에 광견병 항원이 존재함을 확인합니다.

프로토콜

검체 채취와 관련된 모든 절차는 연구소의 IRB 지침에 따라 수행되었습니다.

1. 조직의 포르말린 고정

1. 부검 후 채취한 3-5mm의 뇌 조직을 10% 인산염 완충 포르말린 용액(1:20 - 1:50 조직/포르말린 비율)에 24-72 h.
   동안 놓습니다. 주의: 포르말린은 독성이 있는 정착제입니다.
2. 포르말린의 대략적인 조직 무게(크기), 조직 유형(뇌 영역) 및 부피를 기록합니다. 실험실에서 고정 시간에 대한 기록을 문서화하고 유지하는 것이 중요합니다.
3. 포르말린 고정 후 및 처리 전에 조직을 더 오래 보관하려면 조직을 70% 에탄올에 넣으십시오.

2. 조직 처리

1. 표본 고정 후, 중요한 뇌 영역, 예를 들어 뇌간, 소뇌(3엽) 또는 해마(양쪽 해마)의 단면을 포함하도록 조직을 해부하고 각각 3-5mm 두께로 절단하여 처리 카세트에 넣습니다.
2. 파라핀 왁스 침투를 위해 조직 카세트를 처리하고, 파라핀 블록에 삽입하고, 마이크로톰에서 절편화(3 - 6 μm)합니다.

결과

그림 1: IHC 테스트를 위한 다양한 단계를 나타내는 순서도. 

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
3% 과산화수소	Pharamacy 브랜드		기성품 3% H2O2
3-아미노-9-에틸카르바졸(AEC)	밀리포어 시그마	A6926
아세테이트 완충액 pH 5.2	폴리 사이언티픽 R&D Corp.	S140
완충된 포르말린 10% 인산염 완충	피셔 사이언티픽	재질 보기 SF100-4	인증
커버 슬립 코닝	피셔 사이언티픽	제12-553-471	24 X 50 밀리미터
에탄올 190 프루프	팜코-AAPER	111000190
에탄올 200 프루프	팜코-AAPER	111000200
Gill의 헤마톡실린 제형 #2	피셔 사이언티픽	CS401-1D
HistoMark 비오틴-스트렙타비딘 과산화효소 키트	세라케어	71-00-18	마우스 1차 항체
면역히스토마운트	밀리포어 시그마	나1161	마운팅 미디어
N, N, 디메틸 포름 아미드 GR	피셔 사이언티픽	D119 (영어
인산염 완충 식염수	하이클론	RR14440.01	01M, pH 7.2 (pH 7.2-7.6)
Plan-APOCHROMAT 40X/0.95 대물렌즈	여러 공급업체
Plan-APOCHROMATIC 20X/0.75 대물렌즈	여러 공급업체
프로나제	밀리포어 시그마	53702	프로테아제, 스트렙토마이세스 그리세우스
스콧의 수돗물	폴리 사이언티픽 R&D Corp.	s1887
Tissue-Tek 슬라이드 스테인 세트	피셔 사이언티픽	50-294-72
트윈-80	밀리포어 시그마	P1754
크실렌	피셔 사이언티픽	X3S-4	조직학적 등급
Zeiss Axioplan 2 이미징 - 현미경	여러 공급업체

(영어) 호 시리즈 년 ) 년 호 (영문)