감염된 마우스에서 배출 림프절로의 피부 수지상 세포 이동을 모니터링하기 위한 CFSE 기반 분석

초록

출처: Bollampalli, V. P., et al. Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Guérin에 감염되는 동안 쥐 피부 수지상 세포가 배출되는 림프절로의 이동을 연구하기 위한 CFSE 기반 분석법. J. Vis. 특급 (2016년)

이 비디오는 마우스에서 Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Guérin BCG에 발판 감염 후 수지상 세포 이동을 모니터링하기 위한 분석을 보여줍니다. 세균 감염 시 활성화된 피부 DC 세포는 세포 투과성 카르복시플루오레세인 디아세테이트 숙시니미딜 에스테르(CFSE) 염료로 표지됩니다. 슬와골 배출 림프절로의 DC 이동을 위한 적절한 간격 후, 노드 세포를 분리하고 DC 특이적 표면 마커에 대한 면역 염색을 실시합니다. 마이그레이션된 DC의 식별은 유세포 분석을 사용하여 수행됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. CFSE 재고 및 보관 준비

1. 디메틸 설폭사이드에 5-카르복시플루오레세인 디아세테이트 숙시니미딜 에스테르(CFSE)의 5mM 스톡을 준비합니다. 소용돌이. 100μl 분취액을 멸균 0.5ml 스크류 캡 마이크로튜브에 분주합니다. 부분 표본은 -80 °C에서 보관하십시오.

2. 마우스

1. 생후 8주에서 12주 사이의 근친 교배 수컷 또는 암컷 마우스를 사용하십시오. 성별과 연령이 일치하는 동물이 선호됩니다. 실험을 시작하기 전에 필요한 동물 윤리 허가가 마련되어 있는지 확인하십시오.

3. 이소플루란 가스 마취로 동물의 고정

1. 마취 장치에 이소플루란을 로드합니다. 10ml 기밀 유리 주사기에 이소플루란을 채웁니다. 기포가 유입되지 않도록 합니다. 주사기와 액체 주입구를 제공된 튜브에 연결하고 연결 튜브의 액체가 눈에 띄게 기화기에 들어가려고 할 때까지 푸셔를 앞으....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
이소플루란	백스터	1001936060
5- 및 6-카르복시플루오레세인 디아세테이트 숙시니미딜 에스테르(CFSE)	인비트로젠	C1157 (영문
디메틸 설폭 사이드(DMSO)	시그마	D2650
소 태아 혈청(FBS)	시그마	F7524
바실 칼메트 게랭(BCG)			스트레인 파스퇴르, 사내
Trypan 블루 솔루션	시그마	T8154
에디타			사내에서
아지드화나트륨	시그마	시즌 2002
PBS (PBS)			사내에서
여과된 물			사내에서
BD Plastipak 3 ml 주사기	BD 의료 수술 시스템	309658	대체품: 5ml 주사기
6웰 플레이트	증권 시세	92006
15ml 원심분리기 튜브	증권 시세	91015	폴리프로필렌
5ml 라운드 바닥 튜브	BD 팔콘	3272948	폴리스 티 렌
Univentor 400 마취 장치	유니벤터	8323001
모노젯 3/10ml 주사기	메디캐리어	8881511144	29G x 1/2인치
멸균 필터 장치	증권 시세	99500	PES 멤브레인
EPPI-Pistill 균질화기	슈에트 생명공학	3.200호 512	폴리프로필렌
Allegra X-30R 원심분리기	벡크만 쿨터	B01145
Bürker 계수 챔버	폭스바겐	Tel.: 631-0920
0.5ml 나사 캡 마이크로 튜브	사르슈테트	72.73	폴리프로필렌
1.5 ml Eppendorf 마이크로 원심분리기 튜브	폭스바겐	전화: 700-5239	폴리프로필렌
70 미크론 셀 스트레이너	폭스바겐	Tel.734-0003
FlowJo 세포 분석 소프트웨어	트리 스타
항체	클론	회사
항 체
MHC-II I-A/I-E	엠5/114.15.2	BD 바이오사이언스
CD11b	엠1/70	BD 바이오사이언스
CD11c	헥토리터3	BD 바이오사이언스
CD16/CD32 (Fc 블록)	2.4G2	BD 바이오사이언스
CD326/엡캠	G8.8	바이오레전드
CD103	2.00E+07	바이오레전드
CD80	16-10A1	바이오레전드
CD86	GL-1	바이오레전드

) 표시기 년 표시기 표시기 년 호 분 (영어)