1차 인간 면역 세포의 항진균 활성에 대한 실시간 평가

초록

출처: Brunel, S. F. et al., A. fumigatus에 대한 반응으로 인간 1차 호중구 및 단핵구에 의한 항진균 활성의 라이브 이미징.J. Vis. 특급 (2017년)

이 비디오는 형광 Aspergillus 리포터 분생포자를 사용하여 인간 호중구의 항진균 활성을 분석하기 위한 라이브 셀 이미징을 보여줍니다. 처음에는 적색 형광과 자홍색 형광이 모두 호중구 내에서 검출되는 반면, 적색 형광은 시간이 지남에 따라 감소하여 분생포자의 분해를 나타내고 호중구의 항진균 활성을 확인합니다.

프로토콜

인간 참가자와 관련된 모든 절차는 인간 복지를 위한 제도적, 국가적, 국제적 지침에 따라 수행되었으며 지역 기관 검토 위원회의 검토를 거쳤습니다.

1. A. fumigatus 문화와 조건

1. 설명된 대로 포도당 최소 한천 배지를 준비합니다.
   1. 1M 수산화나트륨(NaOH)을 사용하여 매체를 pH 6.5로 조정하고 120°C에서 20분 동안 오토클레이브합니다.
   2. 65 °C로 식히십시오.
   3. 멸균 흐름 후드에서 작업하면서 냉각된 매체 30mL를 T75 플라스크에 붓고 플라스크 목을 25mL 피펫에 올려 놓은 상태에서 냉각시켜 한천 경사를 만듭니다.
2. 한천에 dsRed Af293-Aspergillus fumigatus 균주를 줄무늬를 만들고 37 ° C + 5 % 이산화탄소 (CO₂)에서 7 일 동안 배양합니다. 두 개의 플라스크는 5mL 인산염 완충 식염수(PBS) 비오틴화 전에서 약 10⁹ 분생분포자를 생성합니다.

2. A. ....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
글리세롤	시그마	G6279 (영문	http://www.sigmaaldrich.com
T75 플라스크	Greiner 바이오 원	658 175	http://www.greinerbioone.com/
PBS (PBS)	지브코	20012-019	https://www.thermofisher.com/
트윈-80	피셔 사이언티픽	10592955	https://nl.fishersci.com/
40 μm 필터	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	22363547	https://www.thermofisher.com/
15ml 팔콘 튜브	Greiner 바이오 원	188 님 261	http://www.greinerbioone.com/
50ml 팔콘 튜브	Greiner 바이오 원	227 261	http://www.greinerbioone.com/
밀리큐	밀리포어	QGARD00R1	나노 순수도 비슷하게 작용합니다. http://www.merckmillipore.com/
비오 틴	분자 프로브	나-6352	https://www.thermofisher.com/uk/en/home/brands/molecular-probes.html
디엠소	시그마	D5879	http://www.sigmaaldrich.com
스트렙타비딘-AF633	분자 프로브	재질 보기 S-21375	AF633은 지금까지 테스트된 형광단 중 식체에서 볼 수 있는 유일한 형광단입니다. https://www.thermofisher.com/uk/en/home/brands/molecular-probes.html
EDTA 혈액 튜브	Greiner 바이오 원	455036	항응고제가 있는 모든 혈액관이 작동해야 합니다. http://www.greinerbioone.com/en/start/
Ficoll-Paque 플러스	GE 헬스케어	Tel.: 17-1440-03	http://www3.gehealthcare.com/
트리판 블루	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	SV3008401	https://www.thermofisher.com/
HBSS (하이브에스)	지브코	14170112	https://www.thermofisher.com/uk/en/home/brands/gibco.html
CD14 마이크로비즈	Myltenyi 바이오텍	Tel.: 130-050-201	다른 단핵구 분리 방법도 사용할 수 있으며, 노동 집약적이지 않고 일관되게 높은 순도의 단핵구를 제공하기 때문에 이 방법을 선호합니다. http://www.miltenyibiotec.com/en/
MS 컬럼	Myltenyi 바이오텍	Tel.: 130-042-201	CD14 마이크로비즈에 대한 설명을 참조하십시오. http://www.miltenyibiotec.com/en/
RPMI + 글루타맥스	지브코	제72400-021	https://www.thermofisher.com/uk/en/home/brands/gibco.html
CO2 독립 매체	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	18045054	이미징 중 CO2 교환이 충분하지 않은 경우 필요합니다. https://www.thermofisher.com/uk/en/home
μ 슬라이드 8웰 유리 바닥	이비디	80827	이것은 우리가 사용하는 이미징 접시이지만 적절한 크기의 유리 이미징 접시가 작동해야 합니다. http://ibidi.com/
UltraVIEW VoX 3D 라이브 셀 이미징 시스템	퍼킨 엘머	L7267000	수집 및 분석을 위한 volocity 소프트웨어가 포함되어 있습니다.http://www.perkinelmer.com/

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