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방법 논문
882 조회수
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2025년 7월 8일
출처: Tai, C., et al. 항바이러스 화합물의 식별 및 평가를 위한 조기 바이러스 진입 분석. J. Vis. 특급 (2015).
이 비디오는 바이러스가 숙주 세포로 진입하고 엔도솜과 융합하는 특정 단계를 표적으로 하는 항바이러스제를 평가하기 위한 분석을 보여줍니다. 세포는 저온에서 배양된 다음 HCV에 감염됩니다. 낮은 온도는 숙주 세포에 대한 바이러스 결합을 허용하지만 내포작용(endocytosis)을 통한 내재화를 억제합니다. 테스트 항바이러스 화합물을 첨가하고 세포를 생리학적 온도에서 배양합니다. 이러한 더 높은 온도로의 이동은 바이러스 진입을 용이하게 하고 엔도솜과의 바이러스 외피 융합에 대한 테스트 화합물의 영향을 평가할 수 있습니다.
참고: 세포 배양 및 바이러스 감염과 관련된 모든 절차가 취급되는 샘플의 생물 안전성 수준에 적합한 인증된 생물 안전 후드에서 수행되도록 합니다. 프로토콜을 설명하기 위해 Gaussia luciferase 리포터 태그가 지정된 HCV가 모델 바이러스로 사용됩니다. 대표적인 결과의 맥락에서, 화합물 chebulagic acid(CHLA) 및 punicalagin(PUG)은 초기 바이러스 진입 단계에서 세포 표면 글리코사미노글리칸과 바이러스 당단백질 상호 작용을 표적으로 하는 후보 항바이러스제로 사용됩니다. 많은 바이러스의 침입을 방해하는 것으로 알려진 헤파린은 이러한 맥락에서 양성 대조군 치료제로 사용됩니다.
1. 세포 배양, 화합물 제제 및 복합 세포 독성
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표 1: 바이러스 감염을 위한 숙주 세포 유형.대표 결과에 설명된 각 바이러스 감염 시스템에 사용된 세포 유형이 표시됩니다.
| 바이러스 | 셀 유형 |
| HCMV | 헬 |
| HCV | 응-7.5 |
| 덴브-2 | 베로 |
| MV | 쵸슬램 |
| RSV | HEp-2 |
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| DMEM | 기브코 | 11995-040 | |
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| 페니실린-스트렙토마이신 | 기브코 | 15070-063 | |
| 암포테리신 B | 기브코 | 15290-018 | |
| DMSO | 시그마 | D5879 | |
| 체외 독성학 분석 키트, XTT 기반 | 시그마 | 톡스2 | |
| PBS pH 7.4 | 기브코 | 10010023 | |
| 마이크로플레이트 리더 | 바이오텍 인스트루먼트 (Bio-Tek Instrument, Inc.) | ELx800 | |
| 마이크로 원심분리기 | 써모사이언티픽 | 75002420 | |
| BioLux Gaussia luciferase 분석 키트 | 뉴잉글랜드 바이오랩 | E3300L | |
| 광도계 | 프로메가 | 글로맥스-20/20 | |
| 구연산나트륨, 이수화물 | 시그마 | 71402 | |
| 염화칼륨 | 시그마 | P5405 |
