방법 논문

인플루엔자 A 및 B 바이러스를 정량화하기 위한 분자 기반 분석

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2025년 7월 8일

이 논문에서

초록

출처: Otto, C. C. et al., 인플루엔자 바이러스의 신속한 분자 검출 및 분화 A 및 B. J. Vis. Exp. (2017)

이 비디오는 인플루엔자 바이러스 A와 B를 정량화하기 위한 분석을 보여줍니다. 이 분석은 인플루엔자 특이적 프라이머를 사용한 니킹 엔도뉴클레아제 증폭과 분자 비콘 프로브를 사용한 표적 검출을 사용합니다.

프로토콜

검체 채취와 관련된 모든 절차는 연구소의 IRB 지침에 따라 수행되었습니다.

1. 분석을 실행하기 전에

참고: 인플루엔자 A 및 B 분석은 비인두 면봉 검체 및 바이러스 수송 매체에 저장된 비인두 면봉에 대해 승인되었습니다. 면봉은 키트에 포함되어 있으며 최적의 성능을 위해 사용해야 합니다. 그러나 레이온, 폼, 뭉친 면봉 또는 폴리에스터 비강 면봉도 비강 면봉 샘플을 수집하는 데 사용할 수 있습니다.

  1. 비강 면봉 샘플을 채취하려면 배액이 가장 눈에 띄거나 가장 막힌 콧구멍에 면봉을 삽입합니다. 저항이 생길 때까지 면봉을 콧구멍으로 밀어 넣고 콧구멍에서 천천히 빼낸 후 비강을 향해 여러 번 회전합니다. 면봉을 보관하고 3ml의 바이러스 수송 매체(VTM)가 들어 있는 바이알에 운반합니다.
    알림: 부적절한 검체 수집은 잘못된 결과를 초래할 수 있으므로 적절한 검체 수집에 세심한 주의를 기울여야 합니다.
    참고: 면봉 표본은 채취 후 가능한 한 빨리 검사해야 합니다. 그러나 테스트를 즉시 사용할 수 없는 경우 최대 2시간 동안 실온에서 보관하거나 최대 24시간 동안 2-8°C에서 냉장 보관할 수 있습니다. 새로 채취한 시편은 최적의 시험 성능에 이상적입니다. 부적절한 시료 취급, 보관 및/또는 운송은 잘못된 결과를 초래할 수 있습니다.
    참고: 예방 조치로 이 검사를 수행하는 개인은 표본을 취급할 때 보편적인 예방 조치를 따라 모든 표본을 감염 가능성이 있는 것으로 취급해야 합니다.
  2. 테스트하기 전에 모든 샘플을 실온에 두십시오.
    참고: 모든 테스트 구성 요소는 일회용으로만 사용되며 여러 테스트를 수행하는 데 사용해서는 안 됩니다. 로트 번호가 다른 키트 구성 요소를 혼합하지 마십시오. 유통 기한이 지난 키트 시약을 사용하지 마십시오.
  3. 파란색 샘플 수신기를 가져 오십시오.amp테스트하기 전에 수신기를 실온에 두십시오. 주황색 테스트 베이스는 실온으로 데울 필요 없이 테스트할 수 있습니다.
  4. 모든 시험편은 사용 직전까지 호일 포장에 그대로 두십시오. 기기 측면에 있는 전원 버튼을 눌러 기기를 켭니다. 사용자 ID를 입력하고 '확인'을 누릅니다.

2. 테스트 실행

  1. 테스트 프로세스를 시작하려면 기기 화면에서 '테스트 실행'을 터치합니다. 화면 키보드 또는 바코드 스캐너를 사용하여 환자 ID를 입력하고 '확인'을 누릅니다. 뚜껑을 열고 주황색 테스트 베이스를 주황색 테스트 베이스 홀더에 삽입합니다.
  2. 화면에 올바른 테스트가 표시되는지 확인하고 '확인'을 누릅니다.ample 수신기를 파란색 샘플 수신기 홀더에 넣습니다.
    참고: 용리 버퍼가 올바른 작동 온도에 도달하는 것을 방해하고 테스트 성능에 영향을 미칠 수 있으므로 기기에 넣기 전에 샘플 리시버를 열지 마십시오.
  3. 샘플 수신기가 워밍업될 때까지 기다립니다. 기기에서 지시를 내리면 호일 씰을 제거하고 테스트할 환자 면봉을 샘플 수신기에 넣습니다.
    알림: 호일을 제거할 때 Sample Receiver의 가장자리에 두 손가락을 대고 제자리에 고정되도록 합니다.
  4. 면봉을 액체에 10초 동안 세게 혼합하고 면봉 헤드를 샘플 리시버 측면에 대고 눌러 면봉에서 검체를 제거하는 데 도움이 되도록 혼합합니다. '확인'을 눌러 계속 진행합니다. 테스트 면봉이 바이러스 수송 매체에 보관된 경우 VTM을 10초 동안 소용돌이친 다음 샘플 리시버에 200μl를 추가합니다.
  5. 흰색 전사 카트리지를 파란색 샘플 수신기에 밀어 넣습니다. s를 계속 누르십시오.amp주황색 표시등이 올라갈 때까지 수신기 수신기.
  6. 전송 카트리지를 들어 올려 테스트 베이스에 연결합니다. 카트리지 이송이 올바르게 연결되면 주황색 표시등이 내려가는 것을 관찰하십시오. 뚜껑을 닫고 화면에 "테스트 완료" 메시지가 나타날 때까지 열지 마십시오.

3. 품질 관리(QC)

  1. 홈 화면에서 'Run QC Test'를 터치합니다. 실행할 QC 테스트를 선택합니다. '확인'을 터치하고 화면의 지시에 따라 테스트를 완료하여 테스트하려는 QC 샘플과 일치하는 테스트 유형을 확인합니다.

4. 결과 해석

  1. 테스트 실행이 완료된 후 인플루엔자 A, B 및 알려지지 않은 아형의 존재에 대한 해석과 함께 화면에 표시된 테스트 결과를 관찰합니다. 유효하지 않은 결과의 경우 테스트를 반복합니다.

5. 유지 관리 및 청소

  1. 70% 에탄올 또는 10% 표백제 용액으로 기기와 주변 벤치 영역을 매일 청소하십시오. 광고에 세척액을 뿌립니다.amp 보푸라기가 없는 천으로 청소하십시오. 용액을 기기에 직접 붓지 마십시오.

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공개 사항

선언된 이해 상충이 없습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
Alere i Instrument알레르NAT-000(글로벌), NAT-024(미국)
Alere i 인플루엔자 A & B 24 테스트 키트알레르425-000 (글로벌), 425-024 (미국)
Alere i 바코드 스캐너알레르EQ001001
Alere 범용 프린터알레르55115 (글로벌), alereiprinter (미국)
200 μL 정밀 피펫
200 μL 일회용 피펫 팁
바이러스 수송 매체레멜M4-RT
시리즈

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ABRNAQC

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