바이러스에 감염된 세포에서 다미생물 생물막 개시를 결정하기 위한 분석

초록

출처: Plotkin, B. J. et al., Determination of Biofilm Initiation on Virus-infected Cells by Bacteria and Fungi. J. Vis. 특급 (2016)

이 비디오는 박테리아와 곰팡이에 의해 바이러스에 감염된 세포에서 다미생물 생물막 형성이 시작되는 것을 보여줍니다. 단순 포진 바이러스 감염은 세포에 대한 박테리아 부착을 방해하여 박테리아-진균 공동 국소화를 방지합니다. 대조적으로, 감염되지 않은 세포는 박테리아-진균 공동 국소화 및 생물막 형성 시작을 나타냅니다.

프로토콜

1. HSV 변형 및 처리

참고: 베타-갈락토시다아제 리포터 활성을 가진 재조합 비확산 HSV-1(KOS) gL86 및 HSV-2(KOS) 333gJ^-가 분석에 사용됩니다.

1. 단일 로트의 바이러스를 사용하고 Dulbecco의 변형 독수리 배지(DMEM)와 20% 소 태아 혈청(FBS) 및 탈지유를 1:1 비율로 -80°C에서 사용할 때까지 보관하십시오. 바이러스 로트를 보관하기 전에 o-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside(ONPG) 및 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside(X-Gal) 분석으로 바이러스 농도를 측정합니다.
2. 앞서 설명한 바와 같이 리포터 바이러스 진입 분석을 사용하여 실행된 각 실험 분석에 대해 X-Gal 염색을 통해 바이러스 생존력 및 감염 다중성(MOI)을 측정합니다(그림 1).
3. 바이러스(Opt-MEM)를 원하는 MOI로 희석합니다. 염색하기 전에 단층(파라포름알데히드, 0.5ml/well)을 고정합니다. 바이러스 생존도 대조군을 polymicrobial assay pla....

결과

그림 1. HeLa 세포의 용량 의존적 HSV-1 감염에 대한 X-gal 염색 사진.다양한 MOI에서 HSV-1에 감염된 HeLa 세포 및 X-Gal 염색. (A) X-Gal 염색 모의 감염 HeLa 세포 대조군이 있는 96 웰 플레이트의 웰 내 HeLa 세포; 20x 초기 배율; (B) 10의 감염 다중성(MOI)으로 HSV-1에 감염된 X-Gal 염색 HeLa 세포가 있는 96웰 플레이트의 웰 내 HeLa 세포; 20x 초기 배율; (C) 50의 감염 다중성(MOI)으로 HSV-1에 감염된 X-Gal 염색 HeLa 세포가 있는 96웰 플레이트의 웰 내 HeLa 세포; 20x 초기 배율; 축척 막대는 모두에 적용됩니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
C.알비칸스
BBL 사부로 덱스트로스	BD (영어)	211584
곰팡이 한천	닷 사이언티픽	7205ᅡ
S.아우레우스
만니톨 소금 한천	트로이 바이오로직스	7143B
양 피 한천	트로이 바이오로직스	221239
헬라 세포
1xDMEM(Dubelcco의 변형 이글 배지, 4.5g/L 포도당 및 L-글루타민, 피루브산 나트륨 제외	코 닝	10-017-CM
겐타마이신 50mg/ml	시그마	1397	전체 DMEM에서 50μg/ml의 최종 농도
트립신 EDTA (0.05% 트립신, 0.53M EDTA)용액 1X	코 닝	25-052-CI
소 태아 세럼	애틀랜타 바이오로직스	S11150	전체 DMEM에서 10%의 최종 농도
다른 배지 및 시약
온페이지	써모 사이언티픽(Thermo Scientific	34055
울트라 퓨어 X gal	인비트로젠	제15520-018
HBSS(행크스 밸런스드 솔트 솔루션) 1개	코 닝	20-021-이력서
1XPBS	닷 사이언티픽	30042-500
RIPA 용해	생명 기술	89901
공급
96웰 플레이트	에버그린 사이언티픽	222-8030-01F
배양 튜브 100x13	토마스 사이언티픽	9187L61

) 년 ) 호 년