항생제 투여 시 세균 생존율을 결정하기 위한 ATP 활용 분석

초록

출처: Wang, Liang-Chun 등 ATP 활용 상용 분석 및 생/사멸 염색을 사용한 Neisseria gonorrhoeae 응집체의 항생제 감수성에 대한 정량적 검사. J. Vis. 특급 (2019).

이 동영상은 루시페라아제 글로우 시약을 사용한 간단한 ATP 측정 분석에 대해 설명합니다. 이 분석법은 세프트리악손 치료 후 Neisseria gonorrhoeae 생존을 정량화하는 데 사용됩니다.

프로토콜

1. GC 응집의 생존력 정량화

1. 멸균 애플리케이터를 사용하여 GC를 수집합니다. 플레이트에서 GC를 면봉으로 닦고 4.2% NaHCO₃ 및 1% Kellogg 용액이 보충된 예열 육수(GCP, 표 1)에 GC를 다시 현탁시킵니다. 650nm(OD 650 1 = ~1 x 10⁹ CFU/mL)의 파장에서 분광 광도법을 사용하여 부유 박테리아의 농도를 측정합니다.
2. GC 농도를 ~1 x 10⁸ CFU/mL로 조정합니다.
3. 99μL의 조정된 GC 현탁액을 96웰 플레이트의 웰에 추가합니다.
4. 박테리아가 응집될 수 있도록 37°C에서 6시간 동안 플레이트를 5% CO₂로 배양합니다.
5. 각 웰에 1μL의 연속 희석 세프트리악손(1000, 100, 50, 25, 12.5, 6.2, 3.1, 1.5, 0.8, 0.4, 0.2μg/mL)을 추가합니다. 일부 우물은 대조군 역할을 하기 위해 처리되지 않은 상태로 두십시오.
6. 플레이트를 37 ° C에서 24 시간 동안 5 % CO₂로 배양합니다.
7. 144W 및 20kHz에서 5초 동안 각 ....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
켈로그 보충제 100개
한천	미국 생물학	A0930
BacTiter 어세이	프로메가	G8232 (영문
세프트리악손	티씨아이	C2226
Difco GC 미디엄 베이스	BD (영어)	228950
질산철, 비수화물	시그마-알드리치	254223-10지
포도당	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	BP350-1
BacLight 생염색/사염색	인비트로젠	L7012
MS11 Neisseria 임질 균주			Walter Reed Army Institute for Research의 Herman Schneider 박사가 친절하게 제공합니다.
초음파 처리기	콘테스		9110001와 동일

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