메탈로펩티다아제에 대한 단클론 항체를 생산하기 위한 하이브리도마 기술

초록

출처: Xia, P., et al. 돼지 장 점막 상피에서 아미노펩티다아제 N을 표적으로 하는 단클론 항체 생산. J. Vis. 특급 (2021).

이 비디오는 전통적인 하이브리도마 기술을 사용하여 막 결합 메탈로펩티다아제인 돼지 아미노펩티다아제 N(APN)에 대한 단클론 항체를 생산하는 분석을 보여줍니다. 마우스에 APN을 주입하면 비장 세포를 채취하여 불멸의 골수종 세포와 융합하여 하이브리도마를 생성합니다. 그런 다음 HAT(hypoxanthine-aminopterin-thymidine) 배지를 사용하여 하이브리도마를 선택하고 증식시켜 다양한 APN 에피토프에 특이적인 단클론 항체를 생성합니다.

프로토콜

모든 동물 모델 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 동물 면역

1. 생후 6-8주 된 암컷 BALB/c 마우스에 50μg의 APN 단백질 또는 인산염 완충 식염수(PBS, 음성 대조군)를 보조제와 혼합하여 2주에 한 번 피하주사합니다. 초기 면역에는 열에 의해 살해된 마이코박테리아(Mycobacteria)가 포함된 완전한 프로인드 보조제(Freund's adjuvant)를 사용하고, 부스터 면역에는 불완전한 프로인드 보조제(Incomplete Freund's adjuvant)를 사용합니다. APN 단백질(또는 PBS)과 Freund's adjuvant 또는 incomplete Freund's adjuvant를 각각 동일한 부피로 혼합합니다.
2. 0.05M PBS(pH 9.6)에 희석된 5μg/mL APN 단백질로 코팅된 마이크로타이터 플레이트를 사용하여 간접 효소 결합 면역흡착 분석법(ELISA)을 사용하여 이러한 마우스의 혈청에서 APN에 대한 항체 역가를 검출합니다.

2. APN에 대한 단클론 항체를 생산하는 하이브리도마 기술

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
프로인트의 보조제 완료	시그마-알드리치	F5881	동물 면역 접종
DMEM을 참조하십시오.	지브코	11965092	세포 배양
DMEM-F12	지브코	12634010	세포 배양
향상된 세포 계수 키트-8	Beyotime 생명공학	C0042	세포 생존율 및 활력 측정
소 태아 세럼	지브코	10091	세포 배양
유전학™ 선택적 항생제	지브코	11811098	선택적 항생제
HAT 보충제 (50X)	지브코	21060017	셀 선택
HT 보충제 (100X)	지브코	11067030	셀 선택
불완전한 프로인트 보조제	시그마-알드리치	F5506	동물 면역 접종
마이크로플레이트 리더	(주)바이오텍	상자 998	ELISA 분석
폴리에틸렌 글리콜 1500	로슈진단	10783641001	세포 융합
96웰 마이크로플레이트	코 닝	3599	세포 배양

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