종양에 대한 이중특이성 항체 유도 T 세포 이동을 추적하는 In Vivo 기술

초록

출처: Espinosa-Cotton, M., et al. 루시페라아제 형질도입 인간 T 세포를 사용한 이중특이성 항체 유도 T 세포 트래픽 추적. J. Vis. 특급 (2023).

이 비디오는 마우스 모델에서 종양으로의 이중특이성 항체 유도 T 세포 이동을 추적하는 방법을 보여줍니다. 루시페라아제(Luciferase)에 의해 형질도입된 effector T 세포를 피하 종양 세포 이종이식편을 통해 마우스에 주입합니다. 그런 다음 이중특이성 항체를 도입하여 T 세포와 종양 세포에 결합합니다. T 세포의 국소화는 생물 발광 이미징을 사용하여 추적되며, 신호의 크기는 T 세포가 종양으로 침투하는 정도를 나타냅니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 293T 세포를 루시페라아제로 형질주입 및 바이러스 상층액 수확

1. 293T 세포 배양
   1. Dulbecco의 변형된 이글 배지(DMEM) 1리터에 각각 열 비활성화 소 태아 혈청(FBS) 110mL, 페니실린-스트렙토마이신 11mL를 추가하여 배지를 준비합니다.
   2. 5 x 10⁶ 293T 세포를 해동하고 위에서 설명한 대로 준비된 배지와 함께 T175 플라스크로 옮깁니다.
   3. 293T 셀을 6일 동안 3일마다 1:10으로 분할합니다. 세포가 90% 이상 융합되지 않도록 합니다.
2. 293T 세포의 형질주입
   메모: 293T 세포의 T175 플라스크 1개를 transfection하기 위해 다음과 같은 양의 시약이 계산됩니다. 더 많은 플라스크를 전달해야 하는 경우 그에 따라 조정하십시오.
   1. 피펫을 사용하여 2개의 50mL 튜브 각각에 1.5mL의 배지를 옮깁니다. 튜브 하나에 VSV-G 플라스미드 10μg, Gag/....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
293T 셀	증권 시세	CRL-11268
증권 시세	시그마 알드리치	A7030-10G
CD3/CD28 비즈	Gibco(써모피셔)	11161디
D-루시페린, 칼륨 염	골드바이오	행운-1G
DMEM을 참조하십시오.	Gibco(써모피셔)	11965092
DNA in vitro transfection 시약(polyjet)	SignaGen 연구소	SL100688
에디타	시그마 알드리치	E9884-100G
FBS(증권 시세	Gibco(써모피셔)	10437028
개그/폴 플라스미드	애드진	14887
GFP 플라스미드	애드진	11150-DNA.cg
페니실린-스트렙토마이신	Gibco(써모피셔)	15140122
재조합 인간 IL-2	R&D 시스템	202-IL-010/CF
레트로넥틴	다카라	T100B
트립신	Gibco(써모피셔)	25-300-120
VSV-G 플라스미드	애드진	8454

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