피부 생검 절편에서 알파-시누클레인 응집체를 검출하기 위한 면역형광 분석

초록

출처: Vacchi, E., et al. 자유 부동 면역형광 분석에 의한 피부 말초 신경 섬유의 알파 시누클레인 응집체 표적으로 삼기. J. Vis. 특급. (2019).

이 비디오는 피부 생검 절편에서 신경퇴행성 질환 특이적 알파-시누클레인 응집체를 검출하기 위한 면역형광 분석을 보여줍니다. 자유 부유 면역 염색은 피부 뉴런의 카르복실 말단 가수분해효소와 알파-시누클레인 응집체를 형광 라벨링하는 데 사용됩니다. 컨포칼 현미경 하에서, 두 항체로부터 형광을 가진 세포는 진피 뉴런에 알파-시누클레인 응집체가 존재함을 나타냅니다.

프로토콜

검체 채취와 관련된 모든 절차는 연구소의 IRB 지침에 따라 수행되었습니다.

1. 피부 생검 수집

1. 자격을 갖춘 의사가 적절한 임상 환경에서 피부 생검을 수행하도록 하십시오.
2. 피부 생검을 수행할 부위를 선택하고 알코올 면봉으로 청소합니다.
3. 마취액에 리도카인 1cc 2%를 준비합니다.
4. 바늘을 해당 부위와 평행하게 하여 국소 마취제를 피하에 주입합니다.
5. 마취 효과를 확인한 후 3mm 일회용 펀치를 잡고 회전하고 섬세한 하향 압력을 가하여 표피와 진피를 통해 아래로 회전시켜 피하 지방에 도달 할 때까지
회전시킵니다.
6. 펀치를 빼냅니다.
7. 일회용 집게를 사용하여 피부 플러그를 부드럽게 위로 당깁니다.
8. 가위를 사용하여 지방 조직 수준에서 표본의 바닥을 잘라냅니다.
9. 10mL의 PLP(periodate-lysine-paraformaldehyde) 고정 용액이 들어 있는 튜브에 검체를 넣습니다.
10. 해당 부위를 소독하고 접착 붕대로 덮으십시오.

2. 조직 고정 및 저장....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
5G4(안티 휴먼 αSyneclein 5G4)	Analytik 예나 로보스크린	847-0102004001	마우스 단클론 바이러스
AlexaFluor 488 염소 안티 토끼 IgG	인비트로젠	1971418	2mg/ml
AlexaFluor 594 염소 안티 마우스 IgG	인비트로젠	1922849	2mg/ml
인산수소이나트륨 용액	머크 밀리포어	106586
에틸렌 글리콜	시그마-알드리치	324558
글리세롤	시그마-알드리치	G7757
L-라이신 모노하이드로클로라이드	시그마-알드리치	L5626
파라포름알데히드	알드리치 화학	441244
PGP9.5	아브캠	AB15503	토끼 다클론
소금	시그마	S3014
나트륨 Dihydrogen 인산염 Monohydrate	머크 밀리포어	106346
나트륨 (메타)주기산	시그마-알드리치	S1878
트리즈마 베이스	시그마	T1503
트라이튼 X-100	시그마-알드리치	엑스100
벡타쉴드	벡터 연구소	H-1000	장착 매체

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