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항체의 특이성 프로파일링을 위한 펩타이드 마이크로어레이 기술

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

출처: Cornett, E. M., et al. 펩타이드 마이크로어레이를 사용한 히스톤 항체 특이성 분석. J. Vis. 특급 (2017).

이 비디오는 펩타이드 마이크로어레이 기술을 적용하여 히스톤 펩타이드에 대한 PTM(Post-Translational Modification)을 인식하는 항체의 특이성을 프로파일링하는 기술을 보여줍니다. 알려진 PTM 조합과 함께 고정된 형광단 접합 히스톤 펩타이드를 포함하는 마이크로어레이 슬라이드를 표적 PTM 특이적 항체로 처리합니다. 이 프로세스는 표적에 대한 항체의 특이성과 비표적 PTM과의 잠재적인 교차 반응을 식별하는 데 도움이 됩니다.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. 어레이 슬라이드 및 소스 플레이트 레이아웃 설계

  1. ArrayNinja 인터페이스의 '슬라이드 레이아웃 계획' 제목 아래에서 사용 중인 마이크로어레이 프린터에 해당하는 링크를 클릭합니다.
    메모: ArrayNinja는 일반적으로 사용되는 두 개의 마이크로어레이 프린터의 로봇 움직임을 모방하도록 프로그래밍되었습니다(표 1 참조). 다른 arrayer와의 호환성은 요청 시 구성할 수 있습니다.
  2. 'Load plate' 대화 상자 내부를 클릭하고 "empty"를 입력한 다음 'enter'를 클릭합니다. ArrayNinja 디자인 모듈의 스크린샷은 그림 1을 참조하십시오.
  3. 스폿 직경을 275μm로, 스폿 간격을 375μm로 조정합니다. 나머지 설정(플레이트 블록/플레이트 행, 총 플레이트 행, 복제, y의 피처, 슈퍼 어레이, SuperA 퍼지, 그림 1 참조)을 조정하여 피처가 마이크로어레이 슬라이드에 표시되는 방식을 사용자 정의합니다.
    메모: 스폿 직경은 마이크로어레이 핀의 크기에 의해 결정됩니다. 이러한 설정이 조정되면 만화 슬라이드가 실시간....

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
그림 1 : ArrayNinja 디자인 모듈. ArrayNinja 디자인 모듈의 스크린샷이 점선으로 표시되어 있습니다. 제어판(상단)에는 마이크로어레이 프린터에서 변경할 수 있는 모든 매개변수가 표시됩니다. 이러한 매개변수가 조정되면 슬라이드 레이아웃(왼쪽 하단)의 만화 이미지가 실시간으로 업데이트됩니다. 레이아웃이 설정되면 사용자는 개별 지점 위로 마우스를 가져가 고유한 기능 식별자를 입력할 수 있습니다. ArrayNinja는 이 사용자 입력에서 지정된 마이크로어레이 슬라이드 레이아웃을 제작하는 데 필요한 소스 플레이트(오른쪽 하단)의 각 기능 위치 맵을 구성합니다.

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
선언된 이해 상충이 없습니다.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
인쇄 버퍼어레이잇증권 시세
증권 시세옴니퓨어2390
Streptavidin-coated 유리 현미경 슬라이드그라이너 바이오 원제439003-25
폴리프로필렌 384웰 플레이트그라이너 바이오 원784201
비오틴-플루오레세인시그마53608
Microarray 프린터 접촉오숀2470Aushon 2470 마이크로어레이 프린터
Microarray 프린터 접촉유전자 기계옴니그리드 100OmniGrid Microarray 프린터
PBS (PBS)인비트로젠14190
블로킹 버퍼어레이잇증권 시세
소수성 왁스 펜벡터 랩스H-4000ImmEdge 소수성 배리어 PAP 펜
실리콘 개스킷그레이스 바이오 랩스622511
하이브리드화 용기써모 사이언티픽(Thermo Scientific267061또는 이와 유사한 선박
형광 염료 접합 2차 항체생명 기술A-21244Alexa Fluor 647 (토끼 퇴치)
형광 염료 접합 2차 항체생명 기술A-21235Alexa Fluor 647(마우스 방지)
왁스 임프린터어레이잇MSI48
트윈-20옴니퓨어9490
Microarray 스캐너이노시스이노스캔 1100AL또는 동등한 microarray 스캐너
EipTitan 히스톤 펩타이드 마이크로어레이에피키퍼112001
AbSurance Pro 히스톤 펩타이드 마이크로어레이밀리포어16668
MODified 히스톤 펩타이드 어레이액티브 모티프13001
히스톤 코드 펩타이드 마이크로어레이증권 시세His_MA_01
밀랍로얄 오크걸프왁스왁스 임프린터용
가습된 마이크로어레이 슬라이드 혼성화 챔버폭스바겐97000-284
고처리량 현미경 슬라이드 세척실어레이잇증권 시세
현미경 슬라이드 원심분리기폭스바겐93000-204
항체 1아브캠8898
항체 2밀리포어07-473
비오틴화 히스톤 펩타이드에피사이퍼2001년 12월펩타이드의 예. 다양한 변형을 가진 유사한 펩타이드는 여러 상업적 출처에서 구할 수 있습니다.
이미지매직(ImageMagick)https://www.imagemagick.org/script/index.php
어레이닌자https://rothbartlab.vai.org/tools/
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Peptide MicroarrayAntibody SpecificityHistone PeptidesPost Translational ModificationsFluorescence DetectionMicroarray ScannerHybridization BufferSecondary AntibodiesBlocking BufferWax Imprinter

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