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검체 채취와 관련된 모든 절차는 연구소의 IRB 지침에 따라 수행되었습니다.
1. 스터디 그룹의 기본 정보
참고: AIR-SKLRD(State Key Laboratory of Respiratory Disease)의 알레르기 정보 저장소는 광저우 호흡기 병원 연구소(GIRH) 내에 설립된 대규모 혈청 은행입니다. 지난 10년 동안 시작된 AIR-SKLRD는 이미 알레르기 질환 환자의 혈청 샘플과 임상 정보를 수집 및 저장하기 시작했습니다(표 1). 본 연구는 AIR-SKLRD의 혈청으로 수행되었다.
- 2015년 1월부터 2018년 6월까지 수집된 혈청에 대한 AIR-SKLRD의 데이터베이스를 검색하고 해당 지역의 일반적인 알레르기 항원에 민감한 것으로 확인된 알레르기 질환 환자를 선택합니다.
- 선정된 모든 환자가 알레르기 비염 및/또는 천식, 알레르기 피부염 및/또는 두드러기와 같은 알레르기 관련 질환을 가지고 있는지, 그리고 이러한 환자의 혈청에 시스템 1에 의해 검출된 이 부위의 일반적인 알레르기 항원의 여러 혈청 알레르기 항원 특이적 면역글로불린 E(sIgE) 감작이 포함되어 있는지 확인합니다.
- 불완전한 의료 기록이 있는 환자, 후속 조치를 받지 못한 환자, 과학적 목적을 위한 혈청 검체 사용에 대해 사전 동의를 거부하는 환자, 면역결핍이 확인된 환자, 현재 면역요법 또는 면역조절제를 복용 중인 환자 또는 기생충 감염이 발견된 환자는 제외합니다.
- 실험실 소견에 대한 간섭을 최소화하기 위해 혈청 채취 전에 치료나 약물 처방이 제공되지 않았는지 확인하십시오. 기준을 충족하지 않는 모든 혈청 샘플은 거부되었습니다.
2. 관심 있는 흐름 및 측정 연구
참고: 미세유체 시스템은 19가지 알레르겐을 결정하기 위해 100μL의 혈청이 필요합니다. 정맥혈(5mL)은 분리 젤이 포함된 진공 혈관을 사용하여 각 환자로부터 수집했습니다. 1,000 x g에서 10분 동안 원심분리한 후, 테스트를 위해 상층을 수집했습니다. 사용하지 않은 혈청은 -80°C에서 보관하였다. 테스트 전에 세럼을 실온에서 30분 동안 유지하고 와류 믹서로 흔들었습니다. 반복적인 동결 및 해동 주기는 피했습니다.
- 주로 Dermatophagoides pteronyssinus(d1), Dermatophagoides farinae(d2), Blomia tropicalis(d201), 고양이 비듬(e1), 개 비듬(e5), 버뮤다풀(g2), 티모시풀(g6), 바퀴벌레(i6), 아스페르길루스 푸미가투스(m3), 칸디다 알비칸스의 전체 알레르겐에 대한 sIgE에 대한 혈청 샘플을 테스트합니다.(M5), 돼지풀(W1), 달걀 흰자(F1), 우유(F2), 밀(F4), 땅콩(F13), 대두(F14), 아몬드(F20), 게(F23), 새우(F24). 섹션 3.
에 제공된 지침을 따릅니다.
참고: sIgE 측정은 알레르기 항원 특이 IgE 분석 키트(재료 표 참조)를 사용하여 수행되었으며 화학발광 분석기로 측정했습니다.
- 재현성 연구를 위해 충분한 혈청(최소 900μL)이 있는 샘플 중에서 3개의 샘플을 무작위로 선택합니다. 모든 조건을 변경하지 않고 연속 9일 동안 매일 알레르겐 sIgE에 대한 3가지 혈청을 측정합니다(즉, 100 x 9 = 900μL의 혈청).
3. microfluidic 체계의 반 자동화 시험 절차
참고: 시스템 2는 자동 미세유체 기술, 단백질 마이크로어레이, 냉광 분석, 병렬 IgE 분석 및 이미지 처리 기술을 통합합니다. 테스트 프로토콜은 장비 준비, 샘플 로딩, 배양 및 측정의 네 부분으로 나뉩니다.
- 장비 준비
- PC와 분석기 전원을 켭니다.
메모: 전원 스위치는 베이스 왼쪽에 있습니다.
- PC에서 LabIT 프로그램을 시작합니다. 다크 프레임 경고 창이 나타나면 확인을 클릭하여 LEAK 테스트를 실행합니다. 그런 다음 중앙 로고를 클릭하여 작동 인터페이스로 들어갑니다.
메모: 시스템은 사용자에게 24시간 이상 유휴 상태인 경우 LEAK 테스트를 실행하도록 상기시킵니다.
- 화면 우측 하단에서 Reaction Temp 및 CCD(charge-coupled device) Temp를 확인합니다. 반응 온도는 약 10분 안에 37°C ± 1°C로 상승해야 하고 CCD 온도는 -15°C ± 1°C로 떨어져야 합니다.
- CCD 온도가 -15°C ± 1°C로 떨어진 후 LEAK 테스트를 실행합니다. LEAK 테스트를 실행하기 전에 기기 내부에 다른 물건이 남아 있지 않은지 확인하고 도어를 닫으십시오. 도구 | 시스템 테스트 | LEAK 테스트를 클릭합니다. 테스트 중에는 문을 열지 마십시오. 테스트가 완료되면 보고서 창이 나타납니다.
- 샘플 로딩
- 세척 완충액 620μL, 차단 완충액 120μL, 접합체 A 및 B 60μL, 기판 A 및 B 60μL, 혈청 시료 100μL를 미세유체 카트리지의 해당 시약 탱크에 추가합니다.
- 잠복
- 카트리지 ID를 클릭하고 바코드 스캐너를 사용하여 카트리지의 일련 번호를 스캔하고 샘플 ID를 입력하고 카트리지를 분석기에 넣고 도어를 닫은 다음 분석기 및 실행을 클릭하여 분석을 시작합니다.
- 측량
- 측정 후 결과를 통계 소프트웨어(예: Excel)로 내보냅니다.
참고: 배양 30분 후 분석기는 자동으로 측정을 수행하고 결과를 보고합니다.
표 1: 환자 인구통계학적 특성.총 293명의 피험자가 포함 기준을 충족했으며, 평균 연령은 23세(사분위수 범위는 8세에서 36세 사이)였습니다. 이 중 남성은 170명(58.02%), 여성은 123명(41.98%)이었다. 또, 그 중 92명(31.40%)은 알레르기성 비염, 117명(39.93%)은 알레르기성 천식, 36명(12.29%)은 비염과 천식의 동반질환, 48명(16.38%)은 식품 알레르기나 피부 알레르기 등 기타 알레르기 질환을 가지고 있었다.
일
호
| 특성 | 아니오.( %) |
| 성별, n(%) | |
| 여성 | 123(41.98의 %) |
| 남성 | 170(58.02%) |
| 나이, 년, n(%) | |
| 중앙값(25%,75%) | 23(8,36) |
| ≤10 | 97(33.11의 %) |
| 재질 보기 11-20 | 37명(12.63%) |
| 21-40 | 101(34.47의 %) |
| >41 | 58(19.80의 %) |
| 진단, n(%) | |
| 알레르기 비염 | 92(31.40의 %) |
| 알레르기성 천식 | 117(39.93의 %) |
| 천식을 동반한 알레르기 비염 | 36명(12.29%) |
| 다른 | 48명(16.38%) |