Aβ 펩타이드 특이적 항체 및 Aβ 올리고머를 쥐 해마에 제어 주입

초록

출처: Sajadi, A., et al. 만성 아밀로이드-베타 올리고머 주입의 동물 모델에서 신경 퇴행은 삼투압 펌프가 주입된 항체 처리에 의해 중화됩니다. J. Vis. 특급 (2016).

이 비디오는 아밀로이드-베타(Aβ) 펩타이드 특이적 항체를 쥐의 해마에 지속적으로 주입하는 기술을 보여줍니다. 이 연구는 올리고머와 항체 간의 상호 작용을 연구하기 위해 쥐 해마에 용해성 Aβ 올리고머(Aβo)를 주입하는 것과 결합된 Aβ 펩타이드 특이적 항체의 제어 주입을 위해 양측 캐뉼라 시스템을 이식하는 방법을 사용합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 정위 수술 전 카테터 준비

1. 캐뉼러를 삼투압 펌프와 연결하는 데 사용할 PE50 카테터(길이 6cm)를 자릅니다(그림 1 참조). PE50 카테터에 인공 뇌척수액(aCSF)을 채우고 카테터의 양쪽 끝을 밀봉합니다. 사용할 때까지 카테터를 4°C로 유지하십시오.

2. 입체택시에 의한 캐뉼라 이식

1. 멸균 상태에서 수술을 수행하십시오. 고압증기멸균으로 모든 수술 기구와 재료를 살균합니다. 입체택시 장치와 작업 영역을 철저히 청소하고 70% 에탄올 용액으로 소독합니다. 수술용 마스크, 헤어 보닛, 멸균 장갑을 착용하십시오.
2. 케타민과 자일라진 용액(각각 100mg/kg 및 10mg/kg)을 복강내(i.p)로 주입하여 쥐를 마취합니다. 발가락을 부드럽게 꼬집은 후 움직임을 확인하여 마취를 확인합니다.
3. 수술 최소 30분 전에 마취된 동물에게 비스테로이드성 항염증제(Meloxicam, 1mg/kg)를 피하(s.c.) ....

결과

그림 1. Aβo 주입 중 양측 캐뉼라가 있는 동물의 사진. 가이드 캐뉼라에 삽입된 내부 캐뉼라에 연결된 PE50 카테터를 사용하여 깨어 있고 자유롭게 움직이는 쥐(6일 동안 하루에 한 번)에 Aβo(0.2μg/μl, 1μl) 용액을 주입했습니다. 대조군(Ctl) IgG1 또는 6E10 항체를 사용한 치료는 동물의 견갑골 사이에 피하 위치한 삼투압 펌프를 사용하여 Aβo 주입 부위에 직접 주입했습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
인공 뇌척수액(aCSF)	하버드 기구	전화: 59-7316
PE50 카테터 얇은 벽	플라스틱 1 개	C232CT
케타민 염산염 (100 mg/mL)	바이오니쉬	1989529
자일락신 염산염 (100 mg/mL)	비메다	8XYL004C
멜록시캠(5mg/mL)	노브룩	215670I01
클로르헥시딘 글루코네이트 2%와 이소프로필 알코올 2%의 용액	케어퓨전	260100씨
리도카인 염산염	알베다 제약	0122AG01
부피바카인 하이드로클로라이드	호스피라	1559
안과 연고	Baussh 및 Lomb inc.	2125706
입체식 프레임	스톨팅	51600
입체식 캐뉼라 홀더 암	하버드 기구	전화: 72-4837
훈련	드레멜	8050-N/18
가이드 캐뉼러	플라스틱 1 개	326OPG/스pc씨
주입 캐뉼러	플라스틱 1 개	C315I/상식분리기
더미 캐뉼러	플라스틱 1 개	C315DC/스피씨
봉합사 코팅 비크릴 라피드 4-0	에티콘	VR2297
치과 아크릴 시멘트	하버드 기구	Tel.: 72-6906
나사	JI 모리스 컴퍼니	P0090CE125
6E10 항체(마우스 IgG1 isotype)	바이오레전드	803003
마우스 IgG1 isotype control 항체	아브캠	AB18447
Alzet 삼투압 펌프스 모델 1007D	듀렉트 코퍼레이션	290
이소플루란	백스터	CA2L9100
아밀로이드-베타 1-42	알펩타이드	가-1163-1
해밀턴 주사기(10μL)	피셔 사이언티크	14815279
주입 주사기 펌프 CMA 402	하버드 기구	CMA8003110
주사기 1 mL	BD (영어)	309659
바늘 21G	테루모	NN-2125R
껴안기	로미르 바이오메디컬	RTS04

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