출처: Fang, E. F., et al. 인간 세포에서 미토파지의 체외 및 생체 내 검출, C. Elegans, and Mice. J. Vis. Exp. (2017).
이 비디오는 예쁜꼬마선충의 미토파지를 연구하기 위한 생체 내 분석을 보여줍니다. 선충을 미토파지 유도 약물에 노출시키면 손상된 미토콘드리아의 미토파지 수용체인 DCT-1과 자가포식체막 단백질 LGG-1 사이의 공동 국소화에 의해 미토파지의 발생을 평가합니다.
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방법 논문
형질전환 선충에서 Mitophagy를 검출하기 위한 In Vivo 분석
1K 조회수
⸱
2025년 7월 8일
이 논문에서
초록
프로토콜
1. 예쁜꼬마선충(C. elegans)의 미토파지(Mitophagy) 검출
참고: 선충 C. elegans는 유기체 수준에서 미토파지를 분석할 수 있는 플랫폼을 제공합니다. 미토파지를 모니터링하기 위해 두 가지 균주를 사용할 수 있습니다: (1) 미토콘드리아 표적 로셀라(mtRosella) 또는 (2) GFP와 융합된 미토파지 수용체 DCT-1과 Discosoma sp와 융합된 자가포식좀 마커 LGG-1. 적색 형광 단백질(DsRed).
- Rosella 바이오센서를 사용한 미토패지 모니터링
참고: Rosella는 pH에 민감하지 않은 DsRed와 pH에 민감한 GFP 변형체를 결합한 분자 바이오센서입니다. Rosella 바이오센서는 산성 리소좀(pH ~4.5)과 다른 세포 구획 간의 pH 차이를 활용합니다. 이 바이오센서는 Saccharomyces cerevisiae와 HeLa, HEK293 및 HCT116과 같은 여러 포유류 세포주에서 미토파지를 성공적으로 모니터링하는 데 사용되었습니다. 우리는 이 다재다능한 이중 형광 리포터를 채택하고 체벽 근육 세포에서....
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공개 사항
선언된 이해 상충이 없습니다.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
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| Eclipse TE-2000e 컨포칼 현미경 | 니콘 | #TE-2000E | |
| 공동 로컬라이제이션 소프트웨어 | 볼로시티 | #Volocity 6.3 | 대체 Zeiss ZEN 2012 소프트웨어 |
| IN 세포 조사자 소프트웨어 | GE 헬스케어 생명과학 | #28408974 | |
| 세포 배양 배지 | 써모피셔 | #DMEM-Dulbecco's Modified Eagle 배지 | |
| 페니실린-스트렙토마이신(10,000 U/mL) | 써모피셔 | #15140122 | |
| 소 태아 세럼 | 시그마-알드리치 | #12003C-1000ML | |
| 세포 배양 인큐베이터 | 써모피셔 | #Thermo Forma 3110 CO2 워터 재킷 인큐베이터 | |
| epifluorescence microscope (에피 형광 현미경 | 자이스 | 자이스 악시오 이미저 Z2 | |
| 사진기 | 올림푸스 | 올림푸스 DP71 | |
| 컨포칼 현미경 | 자이스 | 자이스 악시오 옵저버 Z1 | |
| 컨포칼 소프트웨어 | 자이스 | 젠 2012 | |
| 이미지 분석 소프트웨어 | 이미지 J | 공동 국소화 분석 등 | https://imagej.nih.gov/ij/ |
| 통계 분석 소프트웨어 | GraphPad Software Inc., 미국 샌디에이고, | GraphPad Prism 소프트웨어 패키지 | |
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| IR: N2; 예[pdct-1 DCT-1::GFP; pmyo-3 DsRed::LGG-1] | Tavernarakis Nektarios에 대한 자료 문의 | ||
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