단백질 바이오마커 검출을 위한 모세관 전기영동 면역분석

초록

출처: Sage, J. M., et al. 인간 혈소판에서 근위축성 측삭 경화증의 잠재적 바이오마커를 검색하기 위한 모세관 전기영동 면역분석법 사용.J. Vis. 특급(2020년)

이 비디오는 인간의 혈소판에서 근위축성 측삭 경화증(ALS)과 관련된 단백질 바이오마커를 검출하기 위한 모세관 전기영동 면역분석 프로토콜을 보여줍니다. ALS 바이오마커 단백질의 존재 확인은 혈소판 단백질의 크기 기반 분리와 화학발광 검출을 통해 이루어집니다.

프로토콜

검체 채취와 관련된 모든 절차는 연구소의 IRB 지침에 따라 수행되었습니다.

1. 완충액 및 시약의 준비

참고: 제조업체의 지침에 따라 모든 샘플을 준비하십시오. 이 절차를 수행하는 동안 개인 보호 장비(실험실 가운, 장갑 및 고글)를 착용하십시오.

1. 0.941g의 수크로스(11mM 최종 농도), 6.4mL의 5M 염화나트륨(NaCl, 128mM 최종), 5.4mL의 0.2M 인산일나트륨(_NaH2PO4, 4.3mM 최종), 0.2M 인산이나트륨 9.4mL(_Na2HPO4, 7.5mM 최종), 0.352g의 시트르산나트륨(4.8mM 최종), 및 0.115g의 구연산(2.4mM 최종). ddH₂O를 사용하여 총 부피를 250mL로 조정합니다.0.45μm 필터 디스크를 통해 필터링하고 pH를 6.5로 조정합니다. 4°C에서 최대 1년까지 보관하십시오. 사용하기 전에 용액을 실온(RT)에 두십시오.
2. 100mL 최종 부피에 250mM 수크로스, 1mM 에틸렌디아민 테트라아세트산(EDTA) 및 10mM 트리스(....

결과

그림 1: 분석 레이아웃.1차 항체와 표적 단백질 시료 최적화를 모두 하나의 분석으로 수행할 수 있습니다. 모세혈관 2-7, 8-13, 14-19 및 20-24는 다양한 단백질 농도와 1차 항체 범위를 나타냅니다. 모세관 25는 양성 대조군을 나타냅니다. 항-ERK 항체가 사용되었다. 그러나 적절한 양성 대조군이 포함될 수 있습니다.

....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
12-230 kDa 분리 키트	프로테린심플	SM-W004	사전 충전된 분석 플레이트와 25채널 모세관 카트리지 포함
3000G 열순환기	테크네	FTC3G/02	우리는 샘플 혼합물을 가열하기 위해 이 열원체를 사용했습니다
안티 마우스 감지 키트	프로테린심플	제042-205	HRP-conjugated secondary antibody, buffer, luminol reagent, molecular weight marker 포함
Anti-P(S409-410) TDP-43 항체	프로테인터테크	22309-1-AP	인산화된 TDP-43을 인식하는 1차 항체
Anti-P(S409-412) TDP-43 항체	코스모바이오-USA	팁-PTD-P02	인산화된 TDP-43을 인식하는 1차 항체
Anti-Rabbit 탐지 키트	프로테린심플	디엠-001	HRP-conjugated secondary antibody, buffer, luminol reagent, molecular weight marker 포함
Anti-TDP-43 (pan) 항체	프로테인터테크	10782-2-AP	전체 TDP-43 단백질을 인식하는 1차 항체
소닉 디스멤브레이터; 모델100	피셔 사이언티픽		초음파 처리기. 세포막을 파열하는 데 사용됩니다. 이 모델은 단종되었습니다(모델 XL2000-350).
탁상용 원심분리기	에펜도르프	22625004	모델# 5810(스윙 플레이트 버킷 포함
웨스 분석기	프로테린심플	55892-WS-2203	모세관 겔 전기영동을 수행합니다.
SimpleWestern용 나침반(SW)	프로테린심플	버전 4.0.0.	Compass for SW는 SimpleWestern 기기를 위한 제어 및 데이터 분석 애플리케이션입니다

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