이 동영상은 STAGE Tip 절차를 통한 펩타이드 정제를 보여줍니다. 긴 탄화수소 사슬에 결합된 수지 비드를 포함하는 소형 컬럼은 소수성 상호 작용 기반 정제를 용이하게 합니다. 미리 분해된 펩타이드 샘플을 컬럼에 로드하면 펩타이드 단편이 수지 비드에 결합하여 불순물이 통과할 수 있습니다. 소수성 상호작용을 방해하는 용리 완충액이 적용되어 펩타이드 단편을 용리시킵니다.
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방법 논문
펩타이드의 탈염 및 정제를 위한 STAGE 팁 절차
3.1K 조회수
⸱
2026년 1월 15일
이 논문에서
초록
프로토콜
1. 펩타이드의 정제 및 탈염
- 각 펩타이드 샘플에 대해 200μl 피펫 팁에 3개의 C18 수지 층을 포장하여 STop And Go Extraction(STAGE) 팁을 구성합니다.
- 샘플에 1/10 정지 용액(20% 아세토니트릴[ACN]] 및 6% 트리플루오로아세트산[TFA])을 추가합니다.
- 10분 동안 13,200rpm에서 펠릿 침전을 위한 원심분리기 샘플.
- 상등액을 새 2mL 튜브로 옮기고 펠릿을 버립니다.
- 100μl의 100% ACN으로 스테이지 팁을 세척합니다.
- 1000 x g에서 2분 동안 원심분리기 STAGE 팁
메모: 원심분리기 STAGE 모든 액체가 C18 수지를 통과할 때까지 기울입니다. - STAGE 팁을 50μl 버퍼 B(80% ACN, 0.5% 아세트산 및 ddH2O)로 세척합니다.
- 원심분리기 STAGE 팁 1000 x g에서 2분 동안
- 세척STAGE 팁을 200μl 버퍼 A(2% ACN, 0.1% TFA, 0.5% 아세트산 및 ddH2O)로 합니다.
- ....
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공개 사항
선언된 이해 상충이 없습니다.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 15ml 팔콘 튜브 | 폭스바겐 | 제470225-000 | |
| 25 mL 혈청학적 | 피셔 사이언티픽 | 14955235 | |
| 중탄산암모늄(ABC) | 써모피셔 사이언티픽 | A643-500 | |
| 아세트산 | 시그마 알드리치 | 1099510001 | |
| 아세톤 | 시그마 알드리치 | 34850-1L | |
| 아세토니트릴(ACN), MS 등급 | 뚫다 | TS-51101 | |
| BSA 분석 키트 | 폭스바겐 | CA62408-940 | |
| C18 디스크(STAGE 팁) | 피셔 사이언티픽 | 13110019 | |
| 원심분리기 5810 R | 시그마 알드리치 | EP022628188 | |
| 디티오트레이톨(DTT) | 써모피셔 사이언티픽 | R0861 | 1M 분취액을 준비하고 -20°C에서 보관 |
| 소 태아 세럼(FBS) | 써모피셔 사이언티픽 | 12483020 | 해동하고 부분 표본을 준비하여 -20°C에서 보관 |
| 헤페스 | 시그마 알드리치 | H3375 (영문 | 8M 요소 / 40m HEPES 부분 표본을 준비하고 -20 ° C에서 보관하십시오 |
| 고분해능 질량 분석기 | 써모피셔 사이언티픽 | 726042 | |
| 요오도아세트아미드(IAA) | 피셔 사이언티픽 | AAA1471514 | 0.55M 분취액을 준비하고 -20°C에서 보관하십시오.빛 노출을 피하십시오 |
| L-글루타민 | 피셔 사이언티픽 | 25030081 | 해동하고 부분 표본을 준비하여 -20°C에서 보관 |
| LoBind 마이크로 원심분리기 튜브 | 에펜도르프 | 13-698-794 | |
| 맥스퀀트 | https://www.maxquant.org/ | ||
| PCR 스트립 튜브 | 폭스바겐 | 제76318-802 | |
| 페니실린 스트렙토마이신, 암포테리신 | 시그마 알드리치 | A5955 | 해동하고 부분 표본을 준비하여 -20°C에서 보관 |
| 페르세우스자리 | https://www.maxquant.org/Perseus/ | ||
| 인산염 완충 용액(PBS) | 바이오샵 | PBS408 | 실온에서 보관 |
| 프로브 초음파 처리기 | 피셔 사이언티픽 | Tel.: 100-132-894 | |
| 프로테아제 억제제 칵테일(PIC) 정제 | 시그마 알드리치 | 5892791001 | 4°C에서 보관 |
| RPMI 1640 | 써모피셔 사이언티픽 | 11875093 | 4°C에서 보관 |
| 나트륨 도데 실 황산염 (SDS) | 써모피셔 사이언티픽 | J18220입니다. 답1 | 2% SDS 솔루션 준비 |
| SpeedVac 원심분리기 | 에펜도르프 | 07-748-15 | |
| STAGE 티핑 원심분리기 | 소네이션 | STC-V2 | |
| T75 플라스크 | 써모피셔 사이언티픽 | 156499 | |
| 트리플루오로아세트산 | 써모피셔 사이언티픽 | 85183 | |
| 트리스 HCL pH 8.5 | 피셔 사이언티픽 | BP152-1 | 4°C에서 보관 |
| 트립신/LysC | 써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific | A40009 | 부분 표본 및 -20°C에서 보관 |
| 초음파 수조 | 폭스바겐 | 97043-960 | |
| 요소 | 바이오샵 | URE001.1 |
