의 돌기 arborization 감각 뉴런 Drosophila 애벌레 주변 신경 시스템은 일반 신경 세포의 분화의 신경 세포 수준의 특정 메커니즘 모두를 명료하게하다 유용 모델입니다. 우리는 돌기 arborization의 신경 세포 유전자의 모자이크를 생성하고 분석하는 실용적인 가이드를 제시한다.
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이 논문에서
요약
초록
신경 시스템 개발은 정확한 신경 클래스 특정 돌기 개발 및 axonal 배선 다음 신경 세포의 위치와 정체성의 정확한 사양을 필요로합니다. 최근 Drosophila 애벌레 말초 신경계 (PNS)의 돌기 arborization (DA) 감각 뉴런은 신경 세포의 분화 모두 일반 클래스 구체적인 메커니즘을 명료하게하다하는 강력한 유전자 모델이되고 있습니다. 네 가지 주요 DA 신경 세포 클래스 (I - IV) 1이 있습니다. 그들은 증가 dendrite 아버 복잡한 순서에 따라 이름이, 그들의 분화 20-10의 유전자 컨트롤에 클래스 구체적인 차이점을 가지고 있습니다. 1) 그것이 검찰 신경 dendrite 아버가 확산 과일 파리에서 사용할 수있는 강력한 유전자 도구, 2)를 활용할 수 있기 때문에 검찰 감각 시스템은 돌기 형태 11-13의 통제 뒤에 분자 메커니즘을 조사하기 위해 실용적인 모델입니다 광학 CLE 아래에 단지 2 차원에AR 애벌레의 표피)는 쉽게 생체내, 3 고해상도로 시각화하고 있습니다 돌기 형태의 클래스 특정 다양성)은 단순한 대 고도로 분지 돌기 나무의 형성을 제어하는 핵심 요소를 찾을 수 비교 분석을 용이하게, 4 틀에 박힌 돌기 아버 다른 검찰 뉴런의 모양은 morphometric 통계 분석을 용이하게합니다.
DA 신경 세포 활동 애벌레 운동 중앙 패턴 발생기 14-16의 출력을 수정합니다. 다른 신경 세포 DA 수업은 독특한 감각 modalities를 가지고 있고, 자신의 정품 인증 14,16-20 다른 행동 반응을 elicits. 또한 다른 클래스는 복부 신경 코드에 Drosophila 애벌레 중추 신경계 (VNC) 21에 stereotypically axonal 전망을 보낼 수 있습니다. 이러한 예측은 돌기 분야 7,22의 본문 벽에 DA 뉴런 감각 양상과 위치를 모두 지형 표현과 종료, 23. DA axonal 추정치 그래서 시험은 지형 매핑 7,22,23뿐만 아니라, 간단한 회로 modulating 애벌레의 운동 14-17의 배선을 기본 메커니즘을 명료하게하다하는 데 사용할 수 있습니다.
우리는 여기서 MARCM (Repressible 세포 마커와 함께 모자이크 분석) 1,10,25과 Flp 아웃 22,26,27 기술 (그림 1.에 요약)를 통해 24 마킹 검찰의 뉴런을 생성하고 유전자 모자이크를 분석하는 실용적인 가이드를 제시한다.
프로토콜
시약의 1.Preparation
- 칼슘 + + 무료 HL3.1 식염수 28 준비합니다.
- MM 년 : 70 NaCl, 5 KCl, 20 MgCl 2, 10 NaHCO 3, 5 HEPES, 115 자당, 5 trehalose, 산도 7.2. 소독 필터와 4 저장 ° C.
참고 : 칼슘 + + 무료 솔루션 해부하는 동안 근육 수축을 방지합니다.
- MM 년 : 70 NaCl, 5 KCl, 20 MgCl 2, 10 NaHCO 3, 5 HEPES, 115 자당, 5 trehalose, 산도 7.2. 소독 필터와 4 저장 ° C.
- 폴리 - L - 라이신 (PLL) coverslips하십시오.
- -20 ° C.에 4.2ml 물에 100mg PLL을 해산하고 Eppendorf 튜브 및 동결에 300μl aliquots을
- 코팅 coverslips 먼저 해동 나누어지는가 ddH 2 O에서 10ml로 불러 및 코닥 포토 플로의 20μl를 추가하기 전에, 마지막 PLL 농도는 0.7 MG / ML입니다.
- PLL 솔루션에서 30 분에 대한 잠수함의 coverslips은 제거하고 건조 후 물, 건조와 함께 간략하게 린스. 두 번 반복합니다. 치료 coverslips 지난 약 달.
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토론
Drosophila 애벌레 DA 신경 세포 모델은 메커니즘을 조사 한 우수한 유전자 시스템을 제공하는 제어 신경 세포의 형태 및 회로 형성. MARCM은 일반적으로 라벨 및 돌연변이 DA 신경 세포의 클론을 생성하는 데 사용됩니다. MARCM 위해 우리는 두 팬 - 신경 (예 : Gal4 c155) 또는 DA 뉴런 특정 드라이버를 사용합니다. 팬 - 신경 드라이버를 사용하면 직접 공개 주식 센터에서 널리 사용되는 몇 가지 주식을 사용하는 것이 가능합니다. 표시된 클론이 CNS에서 생성되지 않습니다, 그리고 클론이 검찰 axonal 테르의 분석을 복잡 수 있기 때문에 그러나 DA - 뉴런 특정 드라이버를 사용하면 유리한 수 있습니다. 일반적으로 사용되는 DA - 특정 Gal4 라인의 목록은 시모노 외 (2009) 27에서 찾을 수 있습니다. Flp 아웃은 조사단이 concomitantly ectopically 단일 레이블 신경 세포에있는 Gal.......
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
저자는 자금에 대한 RIKEN 주셔서 감사합니다. 우리는 또한 유전과 immunohistochemistry 프로토콜에 대한 토론 Cagri Yalgin, 캐롤라인 Delandre, 그리고 제이 패리쉬 감사드립니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 시약의 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 (옵션) |
|---|---|---|---|
| SZX16 형광 해부 현미경 (GFPHQ 필터 포함) | 올림포스 산 | SZX16 | |
| 곤충 집게 라이브 | FST | 26030-10 | |
| 26mm X 76mm 우울증 슬라이드 유리 | Toshinriko (주) | T8 - R004 | |
| Sylgard 184 (또는 Silpot 184) | 다우 코닝 | 3097358-1004 | |
| 폴리 - L - 라이신 | 시그마 | P - 1524 | 이 제품은 가장 효과적인 입증되었습니다 |
| DPX 장착 매체 | 시그마 | 44,581 | |
| 토끼 방지 GFP | Invitrogen | A - 11122 | 희석 1:500 |
| 쥐 방지 CD8 | Caltag | 5H10 | 희석 1:200 |
| 마우스 안티 - CD2 | ABD serotec | MCA443R | 희석 1:700 |
| 마우스 방지 Fasciclin2 | DSHB | 1D4 | 희석 1시 10분 |
참고문헌
- Grueber, W. B., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Tiling of the Drosophila epidermis by multidendritic sensory neurons. Development. 129, 2867-2878 (2002).
- Crozatier, M., Vincent, A. Control of multidendritic neuron differentiation in Drosophila: the role of Collier. Dev ....
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재인쇄 및 허가
