질량 세포 분석 이미징을 위한 조직 면역염색

초록

이 비디오는 질량 세포 분석 이미징을 위한 조직 샘플 준비에 대해 설명합니다. 조직은 먼저 항원 항원결정기의 가면을 벗기고, 세포를 투과화하며, 비특이적 항체 결합 부위를 차단하기 위해 처리됩니다. 그런 다음 조직을 금속 접합 항체 칵테일과 핵 염색으로 배양합니다. 마지막으로, 처리된 조직 샘플은 광학 스캐너를 사용하여 이미지화됩니다.

프로토콜

1. 조직 전처리:

신선 냉동 조직의 경우:

1. 사용하기 전에 -20°C 냉동고에 유리 Coplin 용기를 최소 1시간 동안 두십시오.
2. -80°C 냉동고에서 슬라이드를 제거하고 -20°C 냉동고의 유리 코플린 병에 최소 15분 동안 넣습니다.
3. 흄 후드 아래에서 앰플 커터를 사용하여 16% 파라포름알데히드(PFA) 유리 앰플을 엽니다. 깨진 유리는 적절하게 버리십시오.
4. 16% PFA 10mL와 30mL 인산염 완충 식염수(PBS)를 플라스틱 Coplin 용기에 추가합니다. PBS가 4°C로 예냉각되었는지 확인합니다.
5. 이 용액을 4°C 냉장고에 최소 15분 동안 옮기십시오.
6. 15분 후 슬라이드가 있는 유리 코플린 용기를 4°C 냉장고에 10분 동안 옮깁니다.
7. 유리병의 슬라이드를 차가운 4% PFA 용액이 들어 있는 플라스틱 Coplin 용기로 옮깁니다.
8. 4% PFA가 함유된 슬라이드를 냉장고 안에서 30분 동안 고정하세요.
9. 슬라이드를 실온 PBS에서 각각 5분 동안 세 번 헹구어 주기 사이에 철저히 헹굽니다.

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결과

그림 1 : 질량 세포 분석 이미징을 위한 조직 면역염색 절차의 개략도

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
장비
코플린 항아리
통풍구가 있는 플라스틱 5슬라이드 메일러
항원 회수 장치(은폐 제거 챔버)
스캐너
화학 물질 및 효소:
크실렌
200 프루프 에탄올
HPLC 물
Abcam ab93684 Tris-EDTA pH9 HIER 버퍼
증권 시세
0.1% 트리션 X-100이 함유된 TBS
BSA가 10%인 TBS
PBS (PBS)
0.2% Trition X-100을 가진 PBS

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