CD4 + HIV에 대한 일회용 Microfluidic 칩을 사용하여 T - 림프구 캡처

프로토콜

1. 안티 CD4 ⁺ biotinlayted 표면 microfluidic 채널을 준비합니다.
2. 주사기 펌프와 microfluidic 채널에 5 ML / 분 샘플 혈액의 10 ML을 주사.
3. PBS로 20 분 20 ML / 분 혈액을 밖으로 플러시.
4. 15 분 5ul/min에 희석 외과 lysing 솔루션 (PBS로 재고 솔루션에서 10 % 희석) 주사.
5. 15 분 알을 품다.
6. 5 ML / 20 분 분 주요 인 경우에는 3 번 CD ⁺ 항체 솔루션 (PBS로 재고 솔루션에서 10 % 희석) 주사.
7. 2 시간 동안 부화.
8. 5 ML / 15 분 분 PBS와 채널을 플러시.
9. 동시에 20 분 5 ML / 분 20 % AF488 CD4 ⁺ 항체, 0.2 % DAPI 주식 솔루션,와 10 %의 보조 인 경우에는 3 번 CD ⁺ 항체를 주사.
10. 20 분 품어.
11. 5 ML / 15 분 분 PBS와 채널을 플러시.
12. 형광 현미경으로 세포를 개수 :
    1. 화이트 (광학) - 흑백 : 셀 및 먼지
    2. UV (DAPI) - 블루 : 세포에만
    3. 블루 (CD4 ⁺⁾ - 초록색 : T - 림프구와 단핵구
    4. 그린 (인 경우에는 3 번 CD ⁺⁾ - 빨간색 : T - 림프구 전용

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
PDMS 마이크로채널				SU-8 몰드로 제작됨
혈액				정상인 피험자로부터 기증받은 혈액. Mass General Hospital, 10 X 고밀도 WBC 또는 Brigham and Women’s Hospital.
PBS	완충액	Invitrogen	14190	1x Dulbecco’s Phosphated Buffered Saline.
FACS 용해액		BD Biosciences	349202	원액을 PBS로 10%까지 희석함.
Anti-CD4+ 비오틴화 항체		Beckman Coulter Inc.	IM0704	Anti-CD4+ 비오틴화 항체로 표면 처리함. 0.2mg 원액과 1ml 탈이온수를 혼합한 후, 원액을 PBS/BSA로 10%까지 희석함.
goat anti-hCD3delta	pAB	Santa Cruz Biotechnology, Inc.	sc-1128	원액을 PBS로 10%까지 희석함
rabbit anti-goat IgG PE		Santa Cruz Biotechnology, Inc.	sc-3755	anti-CD3 항체용 2차 항체, 원액을 PBS로 10%까지 희석함
anti-human CD4+		BD Biosciences	557695	Alexa Fluor 488 표지, 원액을 PBS로 20%까지 희석함.
DAPI		Invitrogen	D1306	4’,6-dianidino-2-phenylindole, dihydrochloride 용액, 원액을 PBS로 0.2%까지 희석함.