마우스 뇌 조직의 2색 자극 라만 산란 이미징

초록

출처: Espinoza, R., et al. 조직 진단을 위한 마우스 뇌의 실시간 2색 자극 라만 산란 영상. J. Vis. Exp. (2022).

이 비디오는 쥐의 뇌 조직 절편에 대한 2색 자극 라만 산란(SRS) 이미징을 보여줍니다. 두 개의 동기화된 레이저 빔이 조직 부분으로 향하여 분자 진동을 여기시켜 빔의 상대적인 강도 변화를 초래합니다. 조직의 지질과 단백질은 레이저 빔의 고유한 주파수 쌍을 사용하여 검출됩니다. 그런 다음 결과 신호에 별도의 색상이 할당되어 조직의 단백질과 지질을 식별하는 데 도움이 되는 2색 이미지를 생성합니다.

프로토콜

동물 샘플과 관련된 모든 절차는 해당 동물 윤리 검토 위원회에서 검토되고 승인되었습니다.

결과

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
100 mm Achromatic Lens	THORLABS	AC254-100-B	광대역, 650 - 1,050 nm, 무채색 렌즈 초점 거리, 100 mm
20MHz 대역통과 필터	Minicircuits	BBP-21.4+	Lumped LC Band Pass Filter, 19.2 - 23.6 MHz, 50 Ω
200 mm 무채색 렌즈	THORLABS	AC254-200-B	광대역, 650 - 1,050 nm, 무채색 렌즈 초점 거리, 200 mm
무채색 Half Waveplate	Union Optic	WPA2210-650-1100-M25.4	광대역 half waveplate
무채색 쿼터 웨이브플레이트	Union Optic	WPA4210-650-1100-M25.4	광대역 쿼터 waveplate
Beam Sampler	THORLABS	BSN11	10:90 Plate Beamsplitter
Dichroic Mirror	THORLABS	DMSP1000	중심 파장이 약 1,000nm인 다른 이색성을 사용할 수 있습니다.
DMSO(디메틸 설폭사이드)	Sigma Aldrich	472301	라만 시프트 교정용 용매. 알려진 라만 피크를 가진 다른 용매를 사용할 수 있습니다.
Electrooptic Amplitude Modulator	THORLABS	EO-AM-NR-C1	직교 변조 및 이중 채널 이미징을 위해 두 개의 EOM이 필요합니다. 더 낮은 구동 전압을 사용할 수 있도록 공진 버전을 사용하는 것이 좋습니다.
false h&E 염색 스크립트	Matlab		https://github.com/TheFuGroup/HE_Staining
fanout buffer	PRL-414B	Pulse Research Lab	1:4 TTL/CMOS 팬아웃 버퍼 및 라인 드라이버, EOM 구동 주파수 및 락인에 대한 참조를 생성하기 위한
Fast Photodiode	THORLABS	DET10A2	Si 검출기, 1ns 상승 시간
Frequency Divider	PRL-220A	Pulse Research Lab	TTL Freq. Divider (f/2, f/4, f/8, f/16), for 레이저 출력에서 20MHz를 생성합니다.
Highly Dispersive Glass Rods	Union Optic	CYLROD01	고분산 H-ZF52A 로드 렌즈 120mm, SF11 로드 렌즈 100 mm
Insight DS+	newport		80MHz의 반복률로 두 개의 동기화 펄스 레이저(1, 040nm에서 하나의 고정 빔과 680-1,300nm 범위의 조정 가능한 빔 하나)를 출력할 수 있는 레이저 시스템.
Lock-in Amplifier	Liquid Instruments	Moku Lab	잠금 증폭기. 취리히 인스트루먼트 HF2LI 또는 이와 유사한 기기도 사용할 수 있습니다.
Mirrors	THORLABS	BB05-E03-10	광대역 유전체 미러, 750 - 1,100 nm. 은색 거울도 사용할 수 있습니다.
Motorized Delay Stage	Zaber	X-DMQ12P-DE52	펌프와 스톡스 레이저의 시간적 겹침을 미세하게 제어하기 위한 지연 단계. 다른 전동 스테이지가 작동해야 합니다.
Oil Immersion Condensor	Nikon	CSC1003	1.4 NA. NA>1.2가 있는 다른 콘덴서를 사용할 수 있습니다.
Oscilloscope	Tektronix	TDS7054	400MHz 대역 이상의 다른 오실로스코프가 작동해야 합니다.
Phase Shifter	SigaTek	SF50A2	변조 주파수의 위상 이동을 위해
Photodiode	Hamamatsu Corp	S3994-01	넓은 면적(10 x 10cm2)의 실리콘 PIN 다이오드. 면적이 넓고 정전 용량이 낮은 다른 다이오드를 사용할 수 있습니다.
편광 빔 스플리터	Union Optic	PBS9025-620-1000	광대역 편광 빔 스플리터
refactive Index Database			refractiveindex.info
Retro-reflector	Edmund Optics	34-408	BBAR 직각 프리즘. 다른 프리즘 또는 역반사체를 사용할 수 있습니다.
RF Power Amplifier	Minicircuits	ZHL-1-2W+	gain block, 5 - 500 MHz, 50 Ω
Scan Mirrors	Cambridge Technologies	6215H	우리는 은색 코팅이 된 5mm 미러 세트를 사용했습니다
ScanImage	Vidrio	ScanImage Basic	레이저 스캐닝 현미경 제어 소프트웨어
Shortpass Filter	THORLABS	FESH1000	25.0 mm 프리미엄 쇼트패스 필터, 차단 파장: 1,000 nm. 스톡스를 효율적으로 억제하기 위해서는 두 개의 필터가 필요할 수 있습니다.
Upright Microscope	Nikon	Eclipse FN1	다른 현미경 프레임도 사용할 수 있습니다. 레이저 스캐닝 현미경을 사용할 수 있는 경우 직접 사용할 수 있습니다. 그렇지 않으면 갈보 스캐너와 스캔 렌즈를 현미경에 추가해야 했습니다.
Water Immersion Objective	Cosmos	XLPLN25XWMP2	다광자 25X Objective의 NA는 1.05입니다. 다른 유사한 목표를 사용할 수 있습니다.