광학 분획기 기법을 사용하여 쥐의 뇌 조직에서 새로 생성된 뉴런 정량화

초록

출처: Olesen, M. V., et al. 전기 경련 요법의 쥐 모델에서 세포 수를 추정하는 광학 분획기 기술. J. vis. exp. (2017).

이 비디오는 뇌 조직에서 새로 생성된 뉴런을 정량화하는 기술을 보여줍니다. Bromodeoxyuridine(BrdU) 표지된 뉴런을 포함하는 해마 조직 절편을 면역조직화학을 사용하여 염색한 후 광학 분획기 기술을 사용하여 조직 두께 전체에 걸쳐 정량화했습니다.

프로토콜

동물 샘플과 관련된 모든 절차는 해당 동물 윤리 검토위원회에서 검토 및 승인되었습니다.

결과

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
5'-bromo-2'deoxyuridine - BrdU	Sigma-Aldrich	19-160
Cresyl Violet	Sigma-Aldrich	C5042	다음을 포함합니다. 재질 1L: 0.2g 크레실 바이올렛; 2.0 g 소디우마세테이트, 3 H2O; 3ml 빙하 아세트산; 1000ml destilled water
Cryoprotectant	Capital Region Pharmacy, DK	861334	다음 재료를 포함합니다: Sucrose; polyvinylpyrrolidon PVP 40; sodiumphosphatebuffer (0.2 M); ethylenglycol; demineralized water.
dH2O	Capital Region Pharmacy, DK	817205
Diaminobenzidine – DAB	Sigma-Aldrich	D5637
Envision-HRP	DAKO	K4001	Peroxidase labeled polymer 염소 활용 anti-mouse immunoglobulins
에탄올 - 70 %	Plum A/S<
에탄올 - 96 %	Plum A/S<
에탄올 - 99.9 %	Plum A/S<
Fetal Bovine Serum	In Vitro	BI-04-003-1A
H2O2 30%	Capital Region Pharmacy, DK	896456
HCl	J. T. Baker	6081
마운팅 medium	Sakura	4583	Tissue Tek
Mouse-anti-BrdU	Becton-Dickinson	347580
PBS 버퍼	Capital Region Pharmacy, DK	853436	pH = 7.4
PFA	VWR	28,794,295	pH = 7.4
인산염 buffer	Capital Region Pharmacy, DK	866533	0.1 mol/l, pH 7.4
Rapid dry mounting medium	Histolab 제품 AB	801	Pertex
Sodium Tetraborate	Merck A/S	1,063,080,500
Sucrose	머크 A/S	1,076,515,000
Triton X-100	Merck A/S	1,086,031,000
Xylene	VWR	28,973,363
Cover slips	Menzel-Gläser	24x50 mm #0
Cryostat	Leica	CM1860
Digital Microcator	Heidenhain	VRZ 401
Glass dish	Brain Resaerch Laboratories	1256
Microscope	Nikon	Eclipse 80i	<
Microscope camera	Olympus	DP72
Microscope slides	VWR	48311-703<
Motorized stage	Prior	H101A
Multidish Containers	Sigma-Aldrich	D6315-1CS	Nuclon 12-wells
New-Cast software	Visiopharm	ver. 4.5.6.440
Objective 2x	Nikon	CFI Plan UW 2X	<
Objective 4x	Nikon	CFI Plan Fluor 4X	<
Objective 10x	Nikon	CFI Plan Fluor 10X
Objective 100x 오일 이멀젼	Nikon	CFI Plan Apo Lambda DM 100X oil	개구 1.40
Orbital shaker	Gemini BV	CM-9	Sarstedt
Slide rack	Sakura	4465	<
슬라이드 염색 접시	Sakura	4457	Tissue-Tek
Specimen disc	Leica	14037008637	<
Staining nets	뇌 연구소	2512	25-wells

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