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동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.
- Diffusion magnetic resonance imaging (MRI)
참고: 확산 가중 영상은 외상 유도 전과 1일 후에 수행됩니다.
- isoflurane(5%)과 O의 혼합물로 채워진 작은 유도실에서 쥐를 마취합니다.2. 쥐가 발이나 꼬리를 꼬집어도 반응하지 않으면 500mL/분의 유속으로 마취를 2%로 줄입니다. 동물을 머리가 먼저 엎드린 자세로 스캐너 침대로 옮깁니다.
- 이빨 막대와 콧방울이 있는 헤드 홀더에 쥐를 놓고 마취를 전달하고 뇌의 중심이 직교 볼륨 MRI 코일의 중심 수준에 올 때까지 머리를 앞으로 밉니다. 각막의 손상을 방지하기 위해 소량의 윤활 연고를 눈에 바르십시오. 스캔하는 동안 움직이지 않도록 작은 테이프 조각으로 머리를 고정하십시오.
- 쥐의 흉부 아래에 압력 패드를 놓아 호흡을 모니터링하고 쥐를 순환하는 따뜻한 물 가열 담요와 버블 랩으로 덮어 쥐를 따뜻하게 유지합니다. 스캔하기 전에 호흡계를 점검하여 신호가 잡음 없이 깨끗하고 호흡 주기가 일정한지 확인하십시오. 필요한 경우 압력 패드를 재배치합니다.
참고: 호흡수는 1,200-1,700ms당 1회 호흡으로 마취 수준을 1%-2% 사이로 조정하여 유지해야 합니다. - 직교 볼륨 코일을 머리 위로 밉니다. 코일 공급업체에서 제공한 지침에 따라 코일의 튜닝 및 매칭 커패시터를 적절한 주파수와 임피던스로 조정하십시오. 스캐너 베드를 스캐너 구멍으로 밀어 넣어 스캔을 시작합니다.
- 올바른 위치를 보장하기 위해 기본 3면 정찰 스캔("트라이파일럿")을 받으십시오.
- span style='font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;text-decoration:none;vertical-align:baseline;white-space:pre-wrap;'>새 스캔 프로토콜 목록에서 트라이파일럿 시퀀스를 선택합니다. 그런 다음 traffic light 버튼을 클릭하여 스캔을 시작합니다.
- 스캔이 완료되면 이미지 디스플레이에 스캔을 로드하고 1) 머리가 똑바로 놓여 있고 2) 뇌가 자석과 코일의 중앙에 위치하는지 확인합니다. 필요한 경우 헤드 및/또는 스캐너 베드의 위치를 조정하고 새 트라이파일럿 스캔을 획득합니다.
- 자동화된 2차 시밍 프로토콜을 사용하여 로컬 자기장 조정: 1.5.1단계에 설명된 대로 2차 시밍 프로토콜을 스캔 컨트롤에 로드합니다. 다음으로 Acq tab | 현재 조정 | 로컬 필드 균질성에 대한 메소드별 조정 분광계 제어 도구에서 창을 사용하여 자동 shim을 시작할 수 있습니다.
- 2단계에서 설명한 대로 RARE(Refocused Echoes) 시퀀스를 사용한 새로운 T1.5.1 Rapid 이미징을 Scan 컨트롤에 로드합니다.
- 다음 매개변수를 제외하고 기본 설정을 사용하여 T2 가중치 이미지를 획득합니다:
- 열기 Edit Scan 반복 시간(TR)과 에코 시간(TE)을 각각 5,500ms와 37ms로 조정합니다. 또한 시야와 매트릭스 크기를 수정하여 109μm x 109μm(기본 해상도 = 156μm x 156μm)의 더 높은 평면 해상도를 허용합니다. 슬라이스 두께는 600μm, 슬라이스 수는 45, RARE 계수는 8로 설정해야 합니다.
- <span style='font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;text-decoration:none;vertical-align:baseline;white-space:pre-wrap;'Geometry editor 슬라이스 패키지를 뇌의 구근과 소뇌를 포함한 올바른 위치에 놓습니다.
- 1.5.1단계에 설명된 대로 B_DIFFUSION 폴더에서 스캔 제어 프로토콜로 3개의 새로운 에코 평면 확산 가중 스핀 에코 시퀀스(DtiEpi)를 로드합니다.
참고: 세 가지 다른 확산 "쉘"을 사용하여 DTI(확산 텐서 이미징) 모델, DKI(확산 첨도 이미징) 모델 및 WMTI(백질 무결성) 모델을 모두 추정할 수 있습니다. 최소 3개의 다른 b-값을 사용하는 것이 좋으며, 가장 높은 b-값은 최대 3000 s/mm입니다2.- 다음 설정과 별도로 기본 설정을 사용하여 확산 가중 이미지(DWI)를 획득합니다.
- 열기 Edit Scan 탭을 클릭하고 아래에서 기하학적 매개변수를 조정합니다. geometry 탭. 시야와 매트릭스 크기를 105 x 105로 조정하여 333 μ의 해상도를 보장합니다. m x 333 μm입니다.
- 슬라이스 방향을 축으로 설정하고 슬라이스 수를 25로 설정하면 슬라이스 두께는 500μm, 슬라이스 간 거리는 600μm가 됩니다. 판독 방향을 오른쪽으로 수정합니다.
- Contrast 탭을 클릭하여 에코 시간을 24ms로, 반복 시간을 6,250으로 조정합니다. 미시시피.
- 대역폭을 250,000Hz로 설정하고 지방 억제를 켭니다. 평균 수를 1로 조정합니다.
- Research 탭을 클릭하고 평균(EPI 세그먼트) 수를 4로 변경합니다.
- Diffusion
- 첫 번째 쉘은 32, 두 번째 쉘은 46, 세 번째 쉘은 64로 확산 방향 수를 조정합니다.
- 사용자 정의 그라데이션 방향 파일을 사용하여 그라데이션 방향을 조정합니다.
- B0 이미지 수를 첫 번째 셸의 경우 5로, 두 번째 셸의 경우 5로, 세 번째 셸의 경우 7로 변경합니다.
- 방향당 b-value를 800 s/mm2 첫 번째 쉘의 경우 1500 s/mm2 두 번째 쉘, 2000 s/mm2 세 번째 쉘용.
참고: 사용자 정의 그라디언트 방향 파일로 그라디언트 방향을 조정하는 것은 Enter Diffusion Directions 예로 변경하거나 DTI_SET_DIRECTIONS 매크로를 사용하여 자동으로 선택합니다.
- <span style='font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;text-decoration:none;vertical-align:baseline;white-space:pre-wrap;'Geometry editor 구근과 소뇌 사이에 시야를 배치하고 대뇌만 포함하는 시야를 배치하여 인공물과 스캔 시간을 줄입니다. Saturation하고 밉니다.
참고: 구근과 소뇌는 해부학적 랜드마크와 트라이 파일럿 스캔의 세 가지 이미지를 기반으로 식별할 수 있습니다.
- traffic light 기호입니다. 상술한 파라미터의 설정을 사용하여, T2-RARE 스캔의 획득 시간은 12분, 첫 번째 DWI 셸은 15분, 두 번째 DWI 셸은 21분, 세 번째 셸은 30분입니다. 총 획득 시간은 약 80분입니다(단일 수신기 채널 시스템에서).
- 스캔 프로토콜이 완료되면 스캐너 베드에서 동물을 꺼내고 37°C의 가열 패드가 있는 깨끗한 케이지에 동물을 넣습니다. 동물이 의식을 되찾으면 가정용 케이지로 되돌립니다.