Measuring Protein Expression in the Rodent Brain Using near-infrared Fluorescence and High-Resolution Scanning(근적외선 형광 및 고해상도 스캐닝을 사용한 설치류 뇌의 단백질 발현 측정)

동물 샘플과 관련된 모든 절차는 해당 동물 윤리 검토위원회에 의해 검토되고 승인되었습니다.

1. 이미징

1. 조직이 아래를 향하도록 하여 슬라이드를 근적외선 스캐닝 인터페이스에 놓습니다. 하나의 유리 슬라이드를 이미지화하거나 선택 도구를 사용하여 한 번에 여러 슬라이드를 이미지화할 수 있습니다.

2. 이미지는 오프셋이 0nm이고 해상도가 21μm인 최고 품질 설정을 사용하여 슬라이드합니다. 스캔은 일반적으로 사용되는 스캔 장비에 따라 13-19시간이 소요됩니다.

3. 이미지를 이미지 분석 소프트웨어(예: Image Studio)로 가져와 반정량 단백질을 보고 표시합니다. 분석.

2. 단백질 발현 분석

1. 이미지 분석 소프트웨어를 열고 Work Area 이미지를 선택합니다. 이(가) 스캔되었습니다.

2. 이미지 분석 소프트웨어에서 스캔한 이미지를 열어 스캔을 보고 볼 파장도 조정합니다. 대비, 밝기 및 배율은 원시 이미지 또는 총 정량화된 방출을 변경하지 않고 표시됩니다.

3. 정량화할 주요 영역을 식별하고 analysis 탭을 클릭한 다음 선택합니다. Draw Rectangle (또는 Draw Ellipse/ Draw Freehand)을 사용하여 정량화할 영역에 사각형을 그립니다.

4. 사각형의 크기를 보려면 ShapesColumns을 선택합니다. 추가 Height 및 width 열을 사용하여 모양 크기를 식별합니다.

참고: 수량화를 비교할 때 모양 크기를 제어하는 것이 중요합니다. 해당 지역에 대한 배출량의 정확한 샘플링을 얻기 위해 원하는 정량화 위치 내에 배치된 동일한 모양을 사용하는 것이 좋습니다.

5. 그런 다음 모양의 이름을 지정하고 반복합니다. 모든 영역이 샘플링되면 columns 탭은 집계 및 분석됩니다.