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방법 논문

자유롭게 움직이는 마우스의 실시간 미세내시경 칼슘 이미징

1.1K 조회수

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2025년 6월 17일

이 논문에서

초록

출처: Lee, H. et. al., Successful In vivo Calcium Imaging with a Head-Mount Miniaturized Microscope in the Amygdala of Freely Vihaving Mouse(자유롭게 행동하는 마우스의 편도체에서 헤드 마운트 소형 현미경을 사용한 성공적인 생체 내 칼슘 이미징). J. Vis. Exp. (2020)

이 비디오는 구배 굴절률 또는 GRIN 렌즈와 소형 현미경을 사용하여 마우스의 생체 내 칼슘 이미징을 보여줍니다. 이 설정은 마찰이 없는 이동식 케이지 시스템 내에서 머리를 고정하여 뉴런을 자극하고 칼슘 이온 유입을 유발합니다. GRIN 렌즈는 뇌의 칼슘 신호를 포착하여 신경 활동을 실시간으로 시각화할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

참고: 이 프로토콜은 바이러스 주입 수술, 구배 굴절률(GRIN) 렌즈 임플란트 수술, GRIN 렌즈 이식 검증, 베이스플레이트 부착, 행동 테스트 중 GCaMP(녹색 형광 단백질(GFP), 칼모듈린(CaM) 및 M13, 미오신 경쇄 키나아제의 펩타이드 서열의 융합) 신호의 광학 기록 및 데이터 처리의 6가지 주요 단계로 구성됩니다(그림 1A). 수술을 제외하고는 상용 소프트웨어 패키지(Inscopix)가 사용됩니다.

1. 정위택시 수술 – 아데노관련바이러스(AAV) 주사
참고: 이 수술에 사용된 마우스 균주는 C57BL6/J입니다. 수술 중 동물의 몸은 멸균 드레이프로 덮여 있으며, 프로토콜의 모든 단계는 멸균 장갑을 착용하여 수행됩니다. 여러 수술은 일반적으로 같은 날에 수행되지 않습니다. 그러나 여러 마우스가 같은 날 동일한 수술을 받아야 하는 경우 각 마우스에 대해 별도의 오토클레이브 수술 도구 세트와 70% 에탄올을 사용하여 마우스 간에 수술 도구를 소독합니다. 수술 중 마우스를 따뜻하게 유지하기 위해 마우스는 정위 프레임에 고정된 후 맞춤형 수술 담요로 덮입니다.

  1. 필요한 모든 수술 도구를 70% 에탄올로 소독하고 해밀턴 주사기와 유리 피펫을 준비합니다. 유리 피펫에 증류수를 채웁니다.
    참고: 프로토콜에 사용된 모든 수술 도구는 고압멸균됩니다. GRIN 렌즈와 두개골 나사는 멸균을 위해 고압멸균할 수 없기 때문에 70% 에탄올을 소독제로 사용하여 염증을 예방합니다. 시도되지는 않았지만 다른 형태의 살균, 예를 들어 가스 또는 화학적 살균이 사용될 수 있습니다.
  2. 복강내 주사로 펜토바르비탈(체중 83mg∙kg-1)로 마우스를 마취합니다. 쥐가 의식을 잃은 후 두개골의 털을 면도합니다.
  3. 70% 에탄올로 두개골 위의 피부를 청소하고 마우스를 입체 프레임에 고정합니다. 조심스럽게 피부를 제거하고 면 팁 애플리케이터를 사용하여 35% 과산화수소 용액으로 두개골 표면을 닦습니다. 수술 중 각막이 건조해지는 것을 방지하기 위해 윤활제 안연고를 바르십시오.
    참고: 일반적으로 무균 피부 제제에만 70% 에탄올을 사용하는 데는 문제가 없지만 요오드 또는 클로르헥시딘 용액과 같은 소독제를 3회 교대로 사용하고 70% 에탄올을 사용하는 것이 좋습니다. 이 프로토콜에서는 쥐 두개골의 결합 조직을 가능한 한 완전히 제거하기 위해 더 높은 농도의 과산화수소가 사용되며, 이는 두개골의 결합 조직이 바닥판이 두개골에 단단히 부착되는 것을 방해하기 때문에 나중에 이미징하는 동안 모션 아티팩트를 줄이는 데 중요합니다. 35% 과산화수소는 일반적으로 사용되는 것(3%)보다 훨씬 높다는 점에 유의해야 합니다.
  4. 입체식 프로브 홀더로 핀을 고정합니다. 브레그마와 람다의 높이를 핀에 맞춥니다.
  5. 개두술을 위한 마우스 두개골의 특정 위치를 찾습니다.
    참고: 바이러스 주입을 위한 측면 편도체(LA)의 좌표는 이 프로토콜의 브레그마에서 (AP, ML, DV) = (-1.6mm, -3.5mm, -4.3mm)입니다(AP; 전방-후방, ML; 내측-외측, DV; Dorsal-Ventral, 각 약어는 브레그마에서 상대적인 축 거리를 나타냅니다). 좌표는 각 실험 조건에 맞게 최적화되어야 합니다.
  6. 두개골 표면을 뚫습니다(그림 1B). 두개골 분획을 인산염 완충 식염수(PBS)로 세척합니다. 집게 또는 27G 바늘을 사용하여 나머지 층을 제거합니다.
    1. 두개골을 드릴링할 때 뇌 조직 표면이 손상되지 않도록 마지막 경막층을 만지지 마십시오. 손상된 뇌 표면은 렌즈 주변에 염증을 유발하여 기록 중에 심각한 움직임 아티팩트와 높은 자가형광을 유발합니다. 개두술은 1.6mm입니다. 드릴 속도는 18,000rpm이고 비트 크기는 0.6mm입니다.
  7. 천공된 부위의 뇌 조직 표면에서 목표 편도체 부위까지 GRIN 렌즈를 낮추기 위해, 브레그마(이 경우 4.2mm, 그림 1C).
  8. 유리 피펫에 3μL의 미네랄 오일과 0.7μL의 AAV 바이러스 용액을 로드합니다.
    참고: 미네랄 오일은 바이러스 용액과 물을 분리하는 데 도움이 됩니다. 0.7μL는 LA를 완전히 덮을 수 있는 LA 바이러스 주입에 최적화된 부피입니다.
  9. 입체식 프로브 홀더에서 핀을 제거하고 유리 피펫을 고정합니다.
  10. 1.5단계에서 언급한 주입 부위에서 유리 피펫을 찾습니다. 출혈이 완전히 멈춘 후 유리 피펫을 뇌 조직에 삽입합니다.
  11. 주입 펌프를 사용하여 유리 피펫을 통해 바이러스를 전달합니다.
    참고: 충분한 수의 GCaMP 발현 세포를 얻으려면 바이러스의 역가가 1 x 1013 vg/mL 이상이어야 합니다. 사출 속도는 0.1μL/min이며 10분 동안 확산됩니다. 출혈이 있는 경우 PBS로 뇌 표면을 세척하십시오. 이 단계에서 뇌 표면을 젖은 상태로 유지하십시오.
  12. 주입이 끝나면 유리 피펫을 천천히 제거하십시오.

2. 정위 수술 – GRIN 렌즈 이식
참고: GRIN 렌즈 임플란트 수술은 이 프로토콜에서 가장 중요한 단계입니다. 성공적인 GRIN 렌즈 이식을 위해서는 GRIN 렌즈의 일관된 느린 움직임이 중요하기 때문에 전동 수술 팔이 유용할 수 있습니다. 전동 수술 팔은 컴퓨터 소프트웨어에 의해 제어되는 정위 매니퓰레이터입니다. 이 프로토콜에는 전동 암이 사용되지만, 이식하는 동안 수정체가 일관되고 천천히 움직이는 한 다른 방법도 사용할 수 있습니다. 장치에 대한 자세한 정보는 재료 표에 있습니다.

  1. 두개골을 뚫어 두 개의 두개골 나사를 이식합니다. 모든 두개골 조각을 PBS로 세척하십시오.
    참고: 이후 광학 이미징에서 모션 아티팩트를 줄이려면 최소 두 개의 나사가 필요합니다. 두 개의 두개골 나사와 GRIN 렌즈 임플란트 위치가 정삼각형을 형성합니다(그림 1B). 개두술의 크기는 나사의 직경에 꼭 맞아야 합니다. 출혈이 있는 경우 PBS로 출혈 표면을 세척하십시오. 드릴 속도는 18,000rpm이고 비트 크기는 0.6mm입니다.
  2. 염증을 방지하기 위해 70% 에탄올로 나사를 소독하십시오. 나사를 가능한 한 깊숙이 이식합니다.
    참고: 나사는 시멘트와 같은 추가 접착 없이 단단히 고정해야 합니다.
  3. 입위축 프레임에 전동 수술 암을 설치합니다. 제어 소프트웨어가 설치된 랩톱 컴퓨터에 필요한 하드웨어를 연결합니다(자료 표).
  4. GRIN 렌즈를 내리기 전에 26G 바늘로 바늘 트랙을 만들 준비를 하십시오.
    참고: 바늘 트랙은 주사 경로를 따라 뇌 구조를 심하게 왜곡하지 않고 편도체와 같은 뇌 심부 영역에 비교적 두꺼운 GRIN 렌즈를 이식하는 데 도움이 되는 일종의 가이드 트랙입니다. 이 가이드 트랙은 비교적 얇은 26G 바늘을 낮추고 들어 올리는 절차에 의해 만들어지기 때문에 바늘 트랙이라고 합니다.
  5. 캐뉼러 홀더를 부착하여 입체 프레임에 바늘을 안정적으로 고정합니다.
  6. 캐뉼라 홀더로 26G 바늘을 잡고 바늘 삽입 부위의 좌표를 계산합니다.
    참고: 이 프로토콜에서 바늘 삽입 부위의 좌표는 바이러스 주입 부위(AP, ML, DV) = (-1.6mm, -3.55mm, -3.7mm)에서 측면으로 50μm입니다.
  7. 제어 소프트웨어에 액세스하고 바늘 위치 조작을 위한 완벽한 준비를 하십시오.
    1. 제어 소프트웨어를 실행하고 새 프로젝트 시작 버튼을 선택하여 제어 세션을 시작합니다.
      참고: 제어 세션에는 여러 개의 빈 상자와 메뉴 버튼이 있습니다. 빈 상자는 좌표에 대한 입력 공간입니다. 빈 상자에 좌표를 입력한 후 전동식 입체 암은 이동 버튼을 클릭하여 이동합니다. Go To 버튼은 입체 암이 움직일 때 STOP 버튼으로 변경됩니다. 여러 메뉴 버튼 중에서 이 프로토콜에는 도구 버튼만 필요합니다.
    2. 도구 버튼을 클릭합니다. Calibrate the frame(프레임 보정) 메뉴 버튼을 클릭하여 제어 소프트웨어를 보정합니다. 캘리브레이션은 매니퓰레이터의 실제 위치가 Stereodrive 소프트웨어에서 값으로 설정되는 프로세스입니다.
  8. 입체매니퓰레이터를 사용하여 두개골 표면의 노출된 뇌 표면에서 바늘 끝을 찾습니다.
    참고: 바늘의 속도는 도구 메뉴의 Microdrive 속도 메뉴를 사용하여 설정합니다. 기본 속도는 3.0mm/s입니다. 그러나 이 단계에서는 0.5mm/s 속도를 사용하는 것이 좋습니다. 바늘의 움직임은 화살표 키로 제어됩니다.
  9. PBS 2-3방울을 첨가하여 뇌 표면을 적시십시오. 컴퓨터 화면의 빈 상자에 LA의 적절한 DV 좌표를 입력합니다. 뇌 표면이 건조하면 바늘이 뇌 조직으로 침투하는 데 방해가 됩니다.
  10. Go To(이동) 버튼을 클릭하여 26G 바늘을 내립니다. 바늘이 DV 좌표에 의해 설정된 대상 부위에 도달하면 자동으로 멈춥니다. 바늘의 속도는 100μm/min입니다. 출혈이 있는 경우 STOP 버튼을 클릭하여 바늘을 멈추고 PBS로 뇌 표면을 씻습니다. 이 단계에서 뇌 표면을 젖은 상태로 유지하십시오. 출혈이 멈춘 후 다시 낮추기 시작합니다.
  11. 바늘이 완전히 움직이지 않으면 컴퓨터 화면의 빈 상자에 45.00mm를 입력합니다.
    참고: 45.00mm는 바늘이 시작 위치로 돌아가는 DV 좌표 값입니다.
  12. Go To(이동 대상) 버튼을 클릭하여 바늘을 들어 올립니다. 바늘 이동 속도는 100-200 μm/min입니다.
  13. 바늘이 움직임을 멈춘 후 뇌 표면의 PBS를 제거합니다. 입체성 프레임에서 바늘과 캐뉼러 홀더를 제거합니다. 실험자는 필요할 때 STOP 버튼을 클릭하여 바늘을 수동으로 멈출 수 있습니다.
  14. 입체식 로드에 렌즈 홀더를 장착합니다. 렌즈 홀더에 GRIN 렌즈를 설치합니다.
    참고: 이 프로토콜에는 LA(직경 0.6mm, 길이 7.3mm)를 대상으로 최적화된 GRIN 렌즈가 사용됩니다. 렌즈 홀더가 준비되지 않은 경우 다른 방법은 불독 클립을 사용하여 GRIN 렌즈를 잡
  15. 는 것입니다.
  16. 렌즈를 70% 에탄올로 소독하고 입체 막대를 입체 안경테에 부착합니다.
  17. GRIN lens의 tip을 두개골 표면의 지정된 위치에 놓습니다(2.8단계에서 설명한 것과 동일한 방법).
    참고: GRIN lens의 좌표는 (AP, ML, DV) = (-1.6 mm, -3.55 mm, -4.2 mm)입니다(그림 1C). 렌즈는 끝이 손상되지 않도록 두개골에 닿지 않아야 합니다.
  18. 2.16단계에서 설명한 렌즈 이식의 DV 좌표에서 "Value A"의 절대값을 빼서 DV 좌표를 계산합니다.
  19. PBS 2-3방울을 뇌 표면에 떨어뜨립니다. 컴퓨터 화면의 빈 상자에 렌즈를 내리려면 1000μm, 올리려면 300μm를 입력합니다.
  20. GRIN 렌즈가 대상 부위에 도달할 때까지 렌즈를 내리고(1000μm 아래로) 올리기(300μm 위로)를 반복합니다. 이 상하 절차는 이식 경로를 따라 뇌 구조의 뒤틀림을 유발할 수 있는 수정체의 하강 절차로 인해 뇌 조직 내부에서 생성된 압력을 해제하는 데 사용됩니다.
    참고: GRIN 렌즈의 이동 속도는 100μm/min입니다. 출혈이 있어도 GRIN 렌즈의 움직임을 멈추지 않고 PBS로 뇌 표면을 씻어냅니다. 이 단계에서 뇌 표면을 젖은 상태로 유지하십시오. 뇌 표면이 건조하면 뇌 조직이 GRIN 렌즈 표면에 달라붙어 뇌 구조의 왜곡을 일으킵니다.
  21. GRIN 렌즈가 대상 부위에 도달하면 PBS를 제거하고 GRIN 렌즈, 나사 및 측벽 주위에 레진 치과용 시멘트를 조심스럽게 바릅니다(그림 1D).
    참고: 두개골 전체에 레진 시멘트를 바르면 모션 아티팩트를 줄일 수 있습니다. 반대로, 수지 시멘트가 실수로 두개골에 부착된 근육을 덮게 되면 운동 아티팩트가 증가합니다.
  22. 수지 치과 시멘트가 굳은 후 렌즈 홀더에서 GRIN 렌즈를 분해하고 두개골 전체에 아크릴 시멘트를 바릅니다(그림 1D).
  23. 헤드 플레이트를 부착하려면 입체 로드에서 렌즈 홀더를 분해하고 테이프를 사용하여 로드 끝에 헤드 플레이트를 부착합니다. 헤드 플레이트가 수평인지 확인합니다.
    참고: 헤드 플레이트가 기울어지면 view. 모바일 홈 케이지 시스템(베이스 플레이트 부착 섹션)에 마우스 헤드를 고정하려면 헤드 플레이트가 필요합니다. 실험자가 시스템을 사용하지 않는 경우 이 단계(2.22단계)와 다음 2.23단계를 건너뜁니다.
  24. 헤드 플레이트가 렌즈 커프 상단에 위치할 때까지 로드를 천천히 내립니다. 헤드 플레이트를 1000μm 더 내립니다. 이식된 GRIN 렌즈의 헤드 플레이트를 헤드 플레이트의 내부 링의 오른쪽 가장자리에 위치하도록 이동합니다.
    참고: 헤드 플레이트는 이식된 GRIN 렌즈 표면보다 낮게 위치해야 합니다. 그렇지 않으면 마이크로 내시경이 아크릴 시멘트로 인해 초점면을 조정하기 위해 이식된 GRIN 렌즈에 충분히 가까이 접근할 수 없습니다.
  25. 아크릴 시멘트를 바르고 헤드 플레이트를 시멘트 층에 부착합니다(그림 1D).
  26. 이식된 GRIN 렌즈 표면에 파라핀 필름을 부착하여 렌즈 표면을 먼지로부터 보호합니다. 그런 다음 파라핀 필름에 제거 가능한 에폭시 본드를 적용하여 파라핀 필름이 렌즈 표면에 유지되도록 합니다.
  27. 마우스의 복강에 진통제인 카프로펜(PBS의 경우 0.5mg/mL)과 항염증제(PBS의 경우 0.02mg/mL) 용액인 덱사메타손을 주사합니다.
    참고: 약물의 용량은 체중에 따라 다릅니다: 카프로펜(체중의 5mg∙kg-1) 및 덱사메타손(체중의 0.2mg∙kg-1). Carprofen과 Dexamethasone은 모두 수술 후와 수술 후 7일 동안 하루에 한 번 투여됩니다.
  28. 가정용 케이지 물에 항생제인 아목시실린 0.3mg/mL를 혼합하여 1주일 동안 약물을 투여합니다.
  29. 마우스를 가정용 케이지로 되돌리고 회복 및 바이러스 전달을 위해 5-8주를 기다립니다.
    참고: 마우스는 마우스가 마취제에서 깨어날 때까지 전기 담요에 깔린 미리 예열된 케이지에서 회수됩니다.

3. GRIN 렌즈 이식 검증
참고: GRIN 렌즈 이식 검증은 이식된 GRIN 렌즈가 GCaMP 발현 세포에 표적이 되는지에 대한 정보를 제공합니다. 이 정보를 기반으로 실험자는 표적이 벗어난 GRIN 렌즈 이식을 한 동물을 제외함으로써 행동 테스트 및 데이터 처리와 같은 시간 소모적인 프로세스에서 시간을 절약할 수 있습니다. 검증 절차 중에 GCaMP 발현이 있는 셀은 기록 시야에 초점을 맞춰야 합니다. 이 단계에서는 이동식 홈 케이지가 사용됩니다. 이동식 홈 케이지는 GRIN 렌즈 이식 및 베이스 플레이트 부착을 검증하는 동안 머리가 고정된 마우스가 다리를 자유롭게 움직일 수 있도록 하는 특수 원형 모양의 장치입니다. 머리가 고정된 마우스의 다리가 놓여 있는 이 장치의 공수 테이블은 머리가 고정되어 있어도 다리의 자유로운 움직임을 가능하게 합니다. 편도체의 외측핵에 있는 세포는 일반적으로 휴지 또는 마취 상태에서 조용하기 때문에 이러한 조건에서는 GCaMP 형광 신호가 거의 감지되지 않기 때문에 GRIN 렌즈 이식 및 베이스플레이트 부착을 검증하는 동안 GCaMP를 발현하는 세포를 찾는 것이 매우 어렵거나 때로는 불가능합니다. 그러나 다리의 움직임은 종종 편도체의 외측 핵 세포에서 GCaMP 형광 신호를 생성하여 현미경을 찾는 데 도움이 될 수 있습니다. 따라서, 모바일 홈 케이지가 이 프로토콜에서 사용됩니다.

  1. 입체식 매니퓰레이터를 이동식 홈 케이지 시스템에 조립합니다.
  2. 1.5% 이소플루란 가스로 마우스를 마취합니다. 마우스가 완전히 의식을 잃은 후 마우스를 모바일 홈 케이지 시스템의 헤드 바에 놓습니다.
  3. 마우스 아래에서 탄소 케이지를 찾습니다. 카본 케이지를 닫고 공기 흐름을 켜서 케이지가 마찰 없이 자유롭게 움직일 수 있도록 합니다. 마우스가 활성화될 때까지 몇 분 정도 기다립니다.
    참고: 공기 흐름 속도는 각 실험 조건(여기서는 100L/min)에 맞게 최적화해야 합니다.
  4. 이식된 GRIN 렌즈 표면의 파라핀 필름과 에폭시 본드를 제거하고 렌즈 페이퍼를 사용하여 70% 에탄올로 렌즈 표면을 닦습니다.
  5. 데이터 수집(DAQ) 소프트웨어(예: Inscopix)를 준비합니다. 이미징 조건을 설정합니다.
    참고: DAQ 소프트웨어는 현미경(LED 발광 다이오드) 전력, 렌즈 초점 등) 및 데이터 저장을 제어하는 데 사용됩니다.
    1. DAQ 상자를 켜고 현미경을 연결합니다. 그런 다음 케이블을 사용하여 직접 또는 무선 인터넷을 통해 랩톱 컴퓨터에 연결하십시오.
      참고: DAQ 소프트웨어는 DAQ 상자(예: Inscopix)라는 추가 하드웨어에 설치됩니다. DAQ 박스를 노트북 컴퓨터에 연결하면 노트북 컴퓨터에서 DAQ 소프트웨어에 액세스할 수 있습니다.
    2. 인터넷 브라우저를 통해 DAQ 소프트웨어에 액세스하십시오 (Firefox 권장).
    3. 정의된 세션에서 필요한 모든 세부 정보(날짜, 마우스 ID 등)를 설정합니다. 그런 다음 Save and Continue(저장 및 계속)를 클릭합니다. 저장한 후 Run 세션에 액세스합니다.
    4. Run Session에서 노출 시간, 게인, 전자 초점 및 노출-LED 전원과 같은 이미징 조건을 설정합니다.
      참고: 게인 및 노출-LED 전원은 실험실 조건에 따라 변경될 수 있습니다. 전기 초점의 권장 값은 500이고 노출 시간은 50ms입니다. LED 전력 및 이득 변경에는 제한이 없습니다. 그러나 빛의 강도가 높을수록 더 많은 백화가 발생할 수 있습니다. 녹화의 노출 시간은 비디오 녹화의 프레임 속도를 결정합니다. 프레임 속도가 높을수록 신호 강도가 줄어듭니다. 프레임 속도는 이미징에 사용되는 GECI에 맞게 최적화되어야 합니다.
  6. 현미경을 입체매니퓰레이터에 고정하려면 현미경 그리퍼가 있는 입체택시 막대를 정위택시 매니퓰레이터에 부착합니다.
    참고: 그리퍼는 정위축 장치에 부착하여 현미경 본체를 대상 뇌 위치에 배치하기 위해 현미경 본체를 고정할 수 있는 작은 액세서리입니다.
  7. 현미경 그리퍼로 현미경을 잡습니다. 현미경에 연결된 LED 조명을 켜고 현미경을 수직으로 정렬합니다. 이식된 GRIN 렌즈의 표면이 나타날 때까지 이미지를 관찰하면서 현미경을 내립니다.
  8. 이식된 GRIN 렌즈의 중심을 뷰의 중앙에 맞춥니다.
    참고: GRIN 렌즈 이식의 검증은 이 단계에서 수행할 수 있습니다(결과 섹션, 그림 2B, 그림 2D, 그림 2F에서 언급).
  9. 이식된 GRIN 렌즈 표면의 이미지를 캡처합니다(키보드의 Prt Sc 버튼 클릭). 이식된 GRIN 렌즈 표면의 이미지는 이후 데이터 처리 중에 비신경 구성 요소를 선택 취소하는 데 필요합니다(6.8단계).
  10. 현미경의 적절한 위치를 찾으십시오. 이미지를 관찰하면서 현미경의 대물 렌즈를 천천히 들어 올려 GCaMP7b 발현이 있는 세포를 검색합니다.
    참고: 이미지 획득의 게인 또는 노출 LED 전력을 조정해야 할 수도 있습니다. GRIN 렌즈 이식의 검증은 이 단계에서 수행할 수 있습니다(결과 섹션, 그림 2A, 그림 2C, 그림 2E에서 언급).

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결과

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그림 1: LA에서 in vivo microendoscopic calcium imaging을 위한 정위 수술을 위한 개략적인 워크플로우 및 다이어그램. (A) LA에서 생체 내 미세내시경 칼슘 이미징의 개략적인 작업 흐름. (B) 바이러스 주사 및 GRIN 렌즈 임플란트 수술을 위한 개두술 부위의 2차원 좌표를 보여주는 현미경 사진. 두 개의 두개골 나사와 렌즈는 정삼각형을 형성합니다. (C) 바이러스 주입 부위와 이식된 GRIN 렌즈 사이의 상대적 ...

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
26G 바늘BD302002수술
AAV1-Syn-GCaMP7b-WPREAddgene104493-AAV1수술
AAV2/1-CaMKiiα-GFP맞춤형 수술
아크릴-치과 시멘트 (Ortho-jet 아크릴 핑크)Lang1334-핑크수술 및 베이스플레이트 부착
공기 흐름 조작기NeurotarNTR000253-04베이스플레이트 부착
AmoxicillinSIGMAA8523-5G수술
카본 케이지Neurotar180mm x 70mm베이스플레이트 부착
CarprofenSIGMAPHR1452-1G외과
데이터 처리 소프트웨어INSCOPIXINSCOPIX 데이터 처리 소프트웨어베이스플레이트 부착 및 행동 테스트
DexamethasoneSIGMAD1756-500MG수술
드릴세양마라톤-4수술
드릴 버ELAUS1/2, Shank104수술
유리 바늘WPIPG10165-4수술
그린 렌즈 (INSCOPIX Proview 렌즈 프로브)INSCOPIX1050-002208수술
해밀턴 주사기해밀턴84875수술
헤드 플레이트Neurotar모델 5수술
노트북 컴퓨터삼성NT950XBV수술
렌즈 홀더, 입체 막대 (INSCOPIX proview 임플란트 키트)INSCOPIX1050-004223수술
현미경 그리퍼INSCOPIX1050-002199베이스플레이트 부착
현미경, DAQ 소프트웨어, 하드웨어INSCOPIXnVista 3.0베이스플레이트 부착 및 행동 테스트
모바일 홈케이지NeurotarMHC V5베이스플레이트 부착
기계화된 팔Neurostar맞춤형수술
기계화된 팔 소프트웨어Neurostar맞춤형수술
제거 가능한 에폭시 본드WPIKwik-Cast수술
수지 시멘트 (Super-bond)선 메디컬슈퍼 본드 C&B수술
두개골 나사스톨팅51457수술
입체 프레임스톨팅51600수술
입체 매니퓰레이터스톨팅51600베이스 플레이트 부착
물 물 용 물 용 물

태그

GRIN 렌즈초소형 현미경편도체 뉴런이동식 케이지 시스템헤드 마운트 현미경형광 단백질실시간 이미징뉴런 활성자유 이동