Visualization of a Mouse Brain Choroid Plexus Using Scanning Electron Microscopy(주사 전자 현미경을 사용한 마우스 뇌 맥락막 신경총의 시각화)

Abstract

출처: Van Wonterghem, E., et al. Microdissection and Whole Mount Scanning Electron Microscopy Visualization of Mouse Choroid Plexus(쥐 맥락막 신경총의 Microdissection and Whole Mount Scanning Electron Microscopy) 시각화. J. Vis. Exp. (2022)

이 비디오는 주사전자현미경(SEM)을 사용하여 마우스 뇌에서 맥락막 신경총 조직을 준비하고 이미징하는 방법을 보여줍니다. 이 공정에는 조직 고정, 탈수 및 전도성 백금 층으로 코팅하여 이미징을 위해 샘플을 안정화하고 준비하는 것이 포함됩니다. SEM은 미세융모로 상피 세포의 상세한 이미지를 캡처하여 조직의 구조적 특징에 대한 통찰력을 제공합니다.

Protocol

동물 샘플과 관련된 모든 절차는 해당 동물 윤리 검토 위원회에서 검토되고 승인되었습니다.

1. 주사전자현미경(SEM)을 이용한 맥락막신경총(CP) 조직의 형태학적 분석

주의: 독성 용액은 다음 처리 단계에서 사용됩니다. 흄 후드에서 샘플 준비를 수행하는 것이 좋습니다.

1. 아래 설명된 대로 SEM에 대한 샘플 준비를 수행합니다.
   1. 새로 분리된 CP를 0.1M Na-cacodylate buffer(pH 7.4)에 2% 파라포름알데히드와 2.5% 글루타르알데히드를 함유한 새로 만든 고정 용액으로 옮깁니다. 4°C에서 하룻밤 동안 배양합니다.
      참고: CP 조직은 매우 연약하고 얇기 때문에 조직을 작은 표본 바구니(재료 표 참조)에 넣어 완충액 간에 이동시켜야 합니다. 이런 식으로 조직의 구조가 더 잘 보존됩니다. 강력한 카코딜레이트 완충액이 EM 고정제의 낮은 pH에 대응할 수 있기 때문에 인산염 완충 식염수(PBS) 기반 고정제보다 카코딜레이트 기반 고정제가 사용됩니다.
   2. 3-5mL의 0.1M Na-cacodylate 완충액(pH 7.4)으로 샘플을 각각 5분 동안 3회 세척합니....

Materials