원자력 현미경을 사용한 마우스 뇌 조직의 기계적 특성 특성화

초록

출처: Canovic, E. P., et al. 원자력 현미경, 충격 압흔 및 유변 물성 측정을 사용하여 뇌 조직의 다중 스케일 기계적 특성을 특성화합니다. J. Vis. Exp. (2016)

이 비디오는 구형 프로브가 있는 캔틸레버가 조직과 상호 작용하고 가해진 힘에 의해 구부러지는 뇌 조직의 점탄성 특성을 측정하기 위해 원자력 현미경(AFM)을 사용하는 방법을 보여줍니다. 검출기로 편향된 레이저 빔은 캔틸레버를 추적하여 압흔 깊이와 힘 완화를 측정하여 조직의 기계적 특성을 특성화할 수 있습니다.

프로토콜

동물 샘플과 관련된 모든 절차는 해당 동물 윤리 검토 위원회에서 검토되고 승인되었습니다.

1. 원자력 현미경(AFM) 지원 압흔

1. 제조업체의 지침에 따라 홍합 유래 바이오 접착제로 직경 60mm의 페트리(P60) 접시를 준비합니다.
   1. 최적의 pH 8.0으로 멸균수에 0.1M 중탄산나트륨으로 구성된 중성 완충 용액을 준비합니다. 중탄산나트륨 완충액을 필터 멸균(0.2미크론)하고 4°C에서 보관합니다.
   2. 층류 후드에서 중탄산나트륨 완충액에 6.25% 홍합 유래 바이오 접착제와 3.125% 수산화나트륨(NaOH) 용액을 혼합합니다.
   3. 직경 60mm의 페트리(P60) 접시에 바이오 접착 용액 100μl를 피펫팅하고 피펫 팁을 사용하여 용액을 직경 3-5cm의 원으로 펴 바릅니다.
   4. P60 접시를 층류 후드에 덮지 않은 상태로 두고 용액을 건조시킵니다(~30분). 식기는 인산염 완충 식염수(PBS)로 1회, 멸균수로 2회 세척합니다. 접시를 층류 후드에서 자연 건조시키고 4°C의 밀봉된 비닐 봉지에 넣어 최대 1개월 동안 보관하십시오.
2. AFM을 보정하고 AFM에서 뇌 샘플을 설정합니다. 참고: 제조업체에....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Hibernate-A 매체	Gibco	A1247501	CO2-성인 조직용 독립 신경 매체
원자력 현미경, MFP-3D-BIO	망명 연구	-
페트리 식기 히터	망명 연구
AFM 프로브, 0.03 N/m, 10 um 반경 붕규산 구체	노바스캔	PT. GS
셀탁	코닝	354240	홍합 유래 바이오 접착제
중탄산나트륨	시그마-알드리치	S5761	대체 공급 업체 사용 가능
수산화나트륨, 1N	시그마-알드리치	59223C	대체 공급업체 사용 가능

{{TAG_ 36}}-