경피적 부고환 정자 흡인 및 처리를 위한 기술

초록

이 비디오는 정액에 정자가 없는 것을 특징으로 하는 상태인 무정자증(azoospermia)을 앓고 있는 환자의 부고환 정자(epirealymal spermatozoa)의 경피적 흡인을 보여줍니다. 이 절차에는 음낭 부위를 소독하고, 특수 배양 용액이 있는 주사기를 사용하여 부고환액을 흡인하고, 수집된 샘플을 처리하여 생존 가능한 정자를 분리하는 작업이 포함됩니다. 그런 다음 준비된 정자는 고급 불임 치료 절차에 사용할 준비가 됩니다.

프로토콜

인간 참가자와 관련된 모든 절차는 인간 복지를 위한 기관, 국가 및 국제 지침에 따라 수행되었으며 지역 기관 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 수술 전 준비

1. 수술 용품 준비
   1. 수술 기구 패키지 1개, 0.7mm 바늘(0.7 x 32 Thin Wall Long Bevel(TWLB))이 장착된 5mL 주사기 2개, 60mL 소독액, 멸균 고무 장갑 2켤레, 멸균 접착 드레싱 1개.
   2. 간호사에게 고압 증기 멸균을 거친 수술 기구 포장에 손상이나 만료가 있는지 검사하도록 요청하십시오. 문제가 없는 것으로 확인되면 기기 테이블에 놓고 외부 층을 엽니다.
   3. 남성과 전문의의 경우: 멸균 고무 장갑을 착용한 다음 수술 기구 패키지의 내부 층을 열어 멸균 표시기 테이프가 자격이 있는지 확인하고 내부의 모든 기구가 완전한지 확인합니다.
   4. 마취 및 수술을 위해 0.7mm 바늘(0.7 x 32TWLB)이 장착된 5mL 주사기 2개를 준비한 후 리도카인 주사제가 들어있는 앰플을 개봉합니다.
   5. 5mL 멸균 주사기를 사용하여 리도카인 주사를 흡입한 후 주사기에서 기포를 제거합니다.
2. 수술 중인 환자의 준비
   1. 환자를 위한 피부 준비를 준비합니다. 일회용 면도기를 사용하여 회음부 치골을 면도하고 회음부와 주변 피부를 비눗물로 씻어 과도한 치골이나 얼룩이 없는지 확인하십시오. 위치
   2. 쇄석술 자세로 환자를 수술대에 올려놓고 바지를 벗고 배꼽 위의 윗옷을 고정하여 배꼽 아래의 회음부와 하복부를 완전히 노출시킵니다.
   3. 환자의 음낭을 비추기 위해 그림자가 없는 램프의 각도를 조정합니다.
   4. 타원형 집게를 사용하여 멸균 거즈 볼을 잡은 다음 소독 용액에 완전히 담가 소독 프로세스를 시작합니다. 주변부에서 음낭까지 다음 순서로 피부 소독을 수행하십시오 : 하복부, 허벅지 앞쪽 및 안쪽, 회음부 부위, 음경 및 음낭.
   5. 초기 소독 후 멸균 거즈 볼을 교체하고 소독 과정을 반복하십시오. 3회 소독 후 수술 전 소독 과정이 완료됩니다.
   6. 소독이 완료된 후 멸균 수건을 깔는 과정을 시작하십시오. 먼저 멸균된 사각 수건을 환자의 엉덩이 아래에 놓은 다음 멸균된 구멍 수건을 수술 부위와 그 주변에 펴서 구멍 부위의 음낭을 완전히 노출시킵니다.
3. G-MOPS-PLUS 배양 용액 준비
   1. 배아 배양실의 기술자에게 멸균 파스퇴르 피펫을 사용하여 약 2mL의 G-MOPS-PLUS 배양 용액을 배양 접시에 옮기도록 요청하십시오. 뚜껑을 제대로 닫은 후 이송 창을 통해 수술실의 간호사에게 전달합니다.
   2. 기구 테이블의 멸균 수건 위에 배양 접시를 놓고 뚜껑을 엽니다.
   3. 다른 5mL 주사기를 사용하여 약 0.2mL의 G-MOPS-PLUS 배양 용액을 흡입한 후 향후 사용을 위해 기포를 제거합니다.

2. 마취 및 수술

1. 남성과 전문의의 경우: 리도카인 주사가 채워진 주사기를 오른손에 들고 왼손으로는 환자의 정자를 고정합니다. 피하에 구멍을 뚫고 소량의 리도카인을 주입하여 팽진을 형성합니다. 그런 다음 피하로 구멍을 뚫고 정자 조직 깊숙이 들어가 혈액 역류가 없는 것을 확인한 후 약 0.5mL의 리도카인을 주입하기 시작합니다. 정자 차단 마취의 더 나은 효과를 얻으려면 같은 천자 지점에서 주사 바늘의 방향을 2-3 회 변경하고 정자에 리도카인을 주입하는 작업을 반복하십시오.
2. 왼손으로 환자의 음낭을 잡고 천자가 필요한 부고환을 고정합니다. 두드리기를 통해 오른손을 사용하여 외과적 천자가 필요한 부고환의 위치를 확인합니다. 그런 다음 위에서 언급한 리도카인이 들어있는 주사기를 잡고 천자 부위의 피부 아래에 주입하여 국소 침투 마취를 실시합니다.
3. 왼손으로 환자의 음낭을 잡고 천자가 필요한 부고환을 고정합니다. 그런 다음 G-MOPS-PLUS 배양액(0.2mL)이 들어있는 5mL 주사기를 오른손에 들고 피부에 수직으로 구멍을 뚫어 부고환 조직으로 침투합니다. 주사기의 압력을 음압으로 유지하고 부고환 조직에 반복적으로 구멍을 뚫어 음압의 영향으로 부고환액이 바늘을 통해 들어가도록 합니다.
4. 계속해서 음압을 유지하고 천자 바늘을 천천히 빼냅니다. 추출된 부고환액을 배양 접시에 주입합니다. 주입이 완료된 후 근처의 G-MOPS-PLUS 배양액을 흡입하여 주사기를 헹구어 배양 접시에 주입되는 수집된 부고환액의 양을 최대화합니다.

3. 수술 표본 처리

1. 부고환 정자 검색 및 관찰
   1. G-MOPS-PLUS 배양액과 부고환액이 들어있는 배양 접시를 이식 창을 통해 배아 실험실 기술자에게 이송합니다.
   2. 배아 배양실의 기술자가 배양 접시를 넘겨받아 도립 광학 현미경의 무대에 올려 놓고 고정합니다. 현미경의 전원 스위치를 켜고 광 조정 버튼을 적절한 광도로 돌립니다.
   3. 도립 광학 현미경의 변환기를 회전하고 10x 대물 렌즈를 선택하고 거친 초점 나선과 미세 초점 나선을 차례로 회전하여 초점 거리를 조정합니다. 초점 상황을 관찰하고 현미경으로 부고환 정자를 검색합니다.
   4. 도립 현미경의 변환기를 40x 대물 렌즈로 계속 회전하고, 미세 초점 나선을 회전하여 초점 거리를 조정하고, 부고환 정자를 필드별로 관찰합니다. 부고환 정자의 수와 질을 평가합니다. 정상적인 부고환 정자가 성숙하여 움직일 수 있는 능력을 얻은 것을 볼 수 있습니다.
2. 부고환 정자의 치료
   1. 충분한 활성 부고환 정자를 관찰한 후 멸균 파스퇴르 피펫을 통해 배양 접시의 액체를 15mL 원심분리 튜브로 옮깁니다.
   2. 위의 원심분리기 튜브를 밸런스 트레이에 놓고 멸균수가 들어 있는 동일한 사양의 원심분리기 튜브를 사용하여 수평을 맞춥니다.
   3. 원심분리기 도어를 열고 원심분리기 튜브를 카드 슬롯에 대칭으로 끼운 다음 원심분리기 도어를 닫습니다. 제어판을 통해 원심력을 500 x g로 설정하고 원심분리 시간을 5분으로 설정합니다. 제어판에서 START 버튼을 눌러 원심분리 프로세스를 시작합니다.
   4. 원심분리 과정이 완료되면 원심분리기 도어를 열고 부고환액이 들어 있는 원심분리기 튜브를 제거합니다. 뚜껑을 풀고 멸균 파스퇴르 피펫으로 상층액을 부드럽게 흡인하고 추출된 상등액을 버립니다.
   5. 멸균 파스퇴르 피펫을 사용하여 약 2mL의 G-IVF-PLUS 배양 용액을 원심분리 튜브에 옮깁니다. 그런 다음 원심분리기 튜브에 용액을 부드럽게 피펫으로 넣어 완전히 재현탁시킵니다.
   6. 균형, 원심분리 및 액체의 상부 층 제거 과정을 반복합니다.
   7. 세포질 내 정자 주사(ICSI)의 필요에 따라 멸균 파스퇴르 피펫을 사용하여 약 0.5mL의 G-IVF-PLUS 배양 용액을 원심분리 튜브에 옮기고 원심분리기 튜브 바닥에 있는 부고환 정자를 부드럽게 불어 완전히 매달아 놓습니다.
   8. 완전히 중단된 부고환 정자를 ICSI 과정에 직접 사용합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Centrifuge	Origio MAXI	G123511110440	최대 RPM: 4000; 최대 RCF : 2826 x g
Centrifuge tube	Falcon	352095	15 mL
조합 시험관 스탠드	Shenzhen Zhicheng Long Technology Co., LTD	None
Culture dish	Falcon	353001	35 mm x 10 mm
소독제 솔루션	Shanghai Likang Disinfection high-tech Co., LTD	20230801S	60 mL
G-IVF PLUS	Vitrolife 스웨덴 AB	511574	부고환 유체 치료를 위한 배양 솔루션
G-MOPS PLUS	Vitrolife Sweden AB	511712	culture solution for puncture operation
높은 보안 배아 파스퇴르 피펫	다윈	D2208003	230 mm, Fire Polished
instrument table	<
Inverted optical microscope	OLYMPUS		IX71
리도카인 염산염 주입	<	5 mL : 0.1 g
Medical balance	Shanghai Guangzheng Medical Instrument Co., LTD	201609-4854<
의료용 수술용 마스크	광저우시 판위 구 Haozheng 건강 자재 공장	161220328	17.5×9.5 cm(펼치기 크기 17.5×17 cm)
모터 구동 작업 테이블	산동 Mingtai 의료 기기 유한 공사	YZB0089-2011	operation table
Self-Adhesive Wound Dressing	Guangzhou Ya Tian Biological Technology Co., LTD	20142140348	6 cm x 7 cm(3 cm x 4 cm)
일회용 멸균 피하 주사기	Shandong Weigao Group Medical polymer Products Co., LTD	20230921	5 mL, 0.7mm(0.7 x 32TWLB) 장착
멸균 파우더 프리 라텍스 수술용 장갑	Beijing Ruijing Latex Products Co., LTD	2023030322	71/2, 61/2
수술 기구 package	Sun Yat-sen University 제3부속병원 공급부	10228376	autoclave 살균
Surgical light	Shanghai Jishun Medical Device Manufacturing Co., LTD	JSL2009-160D
Vertical flow clean table	Suzhou Wanda Purification Technology Co., LTD	DS-CZ-1311006	SH-CJ-2FD-1500

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