Epifluorescent Microscopy를 사용한 슬상 신경절 뉴런 반응의 생체 내 이미징

초록

출처: Fowler, B. E., et al. 미각 자극에 대한 마우스 슬상 신경절 뉴런 반응의 생체 내 칼슘 이미징. J. Vis. 경험. (2021년)

이 비디오는 마취된 마우스에서 외과적으로 노출된 무상 신경절에 테이스터를 전달하고 낙산화 형광 현미경과 함께 GCaMP 형광을 사용하여 실시간 신경 반응을 시각화하여 말초 미각 신호 처리에 대한 연구를 돕는 프로토콜을 보여줍니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. tastant panel
   1. 흡입을 사용하여 슬상에서 액체를 제거합니다. 선택적으로 흡수점을 배치하여 누출을 완화하고 현미경 탐색을 돕습니다.
   2. 현미경 아래 흡수 패드 위에 동물을 놓습니다. 슬상 신경절 찾기: 유용한 랜드마크에는 수포에 남겨진 구멍, 측두골의 구멍 및 일곱 번째 신경이 포함됩니다. epifluorescence scope에서 FITC/GFP(Fluorescein Isothiocyanate/green fluorescent protein) 필터를 사용하여 개별 GCaMP 발현 슬상 신경절 뉴런을 확인합니다. 10x 대물렌즈(작동 거리 10mm)는 개별 세포의 활동을 추적하기에 충분한 해상도를 제공하지만 20x 대물렌즈(작동 거리 12mm)도 사용할 수 있습니다.
   3. 테이스탄트 라인용 분배 바늘을 동물의 입에 단단히 넣습니다. 체액을 잡기 위해 동물의 입 아래에 페트리 접시를 놓습니다.
   4. 카메라가 현미경의 시야를 보고 있는지 확인하십시오. 비디오 녹화 시작을 시식 프레젠테이션 시작과 동기화합니다.
   5. 녹화하는 동안 라이브 피드에서 응답, 드리프트 및 누출을 확인합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
1ml 루어 잠금 장치가 있는 주사기	Fisher Scientific	14-823-30
27 게이지 무딘 디스펜싱 바늘	Fisher Scientific	NC1372532
흡수 포인트	Fisher Scientific	50-930-668
아세설팜 K	피셔 사이언티픽	A149025G
BD 알레르기 전문의 트레이(바늘 부착 포함	셔 사이언티픽	14-829-6D
둔기 견	FST	18200-09
브레드보드	Thor Labs	MB8
맞춤형 헤드 포스트 홀더	eMachineShop		첨부 파일 202410.ems 참조
맞춤형 금속 헤드 포스트	eMachineShop		첨부 파일 참조 202406.ems
DC 온도 컨트롤러	FHC	40-90-8D
디지털 카메라, sCMOS OrcaFlash4 현미경 장착	하마마츠	C13440
해부 범위	라이카	M80
LED 냉광원	라이카 맥로시스템	KL300LED
루어 잠금 장치 1/16" 튜빙 어댑터	Fisher	01-000-116
현미경	Olympus	BX51WI
미니 시리즈 광학 포스트	Thorlabs	MS2R
페트리 접시	Fisher Scientific	FB0875713A
가압 공기	Airgas	AI Z300
셀프 스틱 라벨링 테이프	피셔 사이언티픽	159015R
실리콘 핀치 밸브 튜브 1/32" x 1/16" 외경(피트당)	자동화 사이언티픽	05-14
Snap25-2A-GCaMP6s-D	JAX	25111
학생 파인 가위	파인 과학 도구	91460-11
수술 프로브	Roboz Surgical Store	RS-6067
수술용 프로브 홀더	Roboz Surgical Store	RS-6061
BD Intramedic Tubing	Fisher Scientific	22-046941
2단계 가스 조절기	Airgas	Y12FM244B580-AG
Tygon 비닐 튜브 - 1/16"	Automate Scientific	05-11
Valvelink8.2 디지털/수동 컨트롤러	자동화 Scientific	01-18
Valvelink8.2 핀치 밸브 관류 시스템	자동화 Scientific	17-pp-54
자일라진	아나신	NADA# 139-236

) 피인기 즈