근적외선 형광 이미징을 이용한 마우스 뇌혈전의 시각화

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1. 뇌 조직의 생 체 외 근적외선 형광(NIRF) 혈전 영상

1. 수 후 두피를 제거하고 가위로 두개골을 대공에서 시상 봉합사 쪽으로 자릅니다. 밑에 있는 뇌의 손상을 피하면서 가위를 사용하여 절개된 두개골의 가장자리를 조심스럽게 들어 올려 두개골 천장을 제거하여 반구를 드러냅니다.
2. 근적외선 형광(NIRF) 영상에서 시각화해야 하는 COW(Willis) 동맥 원과 겹칠 수 있으므로 뇌 기저부의 시신경을 뇌 표면에 최대한 가깝게 잘라냅니다. 그런 다음 NIRF 혈전 영상을 위해 Y자형 '중대뇌동맥(MCA)/전대뇌동맥(ACA)/원위 내경동맥(ICA)'을 시각화하기 위해 소뇌 기저부를 부드럽게 압축하여 절단점을 노출시킨 후 원위 ICA를 뇌 표면까지 최대한 잘라냅니다(그림 1A).
3. 제거된 뇌 조직의 NIRF 이미징(여기/방출, 675/690nm, 1초 노출)을 수행하여 베이스가 위를 향하도록 하고(그림 1B, C), COW의 동맥에서 형광 표지된 혈전색전증을 시각화합니다(그림 1D). 그런 다음 뇌의 꼭짓점이 위를 향하도록 추가 이미징을 수행하여 피질 혈전색전증을 시각화합니다. 조직에 식염수 몇 방울을 떨어뜨려 뇌를 건조시키지 마십시오.

그림 1: 대뇌 혈전색전증의 NIRF(Ex viv o Near-Infrared Fluorescent) 이미징 개요. (A와 B) 혈전색전성 뇌졸중이 있는 마우스로부터 대표적인 뇌 조직을 제거했습니다. 뇌를 제거할 때 원위 내경동맥의 중대뇌동맥(MCA) – 전대뇌동맥(ACA) 분기 부위(ICA, 파란색 화살표)에서 혈전색전증(빨간색 화살표)을 잃지 않도록 예방 조치를 취하십시오. (C 및 D) 생체 외 NIRF 혈전 이미징. MCA-ACA 분기 영역의 색전성 폐색 전에 시아닌 5.5(Cy5.5) 형광 마커 C15로 사전 표지된 혈전(D의 빨간색 화살표)을 시각화하기 위해 뇌 조직을 NIRF 이미저(C)의 차광 챔버 내부에 배치합니다.