근적외선 형광 이미징을 이용한 마우스 뇌혈전의 시각화

초록

출처: Kim, DE, et al. 대뇌 혈전색전증을 직접 시각화하기 위한 근적외선 형광 이미징과 마이크로 컴퓨터 단층 촬영을 결합했습니다. J. Vis. 경험. (2016년)

이 비디오는 피브린 특이적 프로브로 표지된 절제된 뇌 조직의 혈전을 시각화하기 위한 근적외선 형광(NIRF) 이미징을 보여줍니다. 근적외선은 프로브를 자극하여 혈전에 형광을 발하게 하여 주요 대뇌 동맥과 작은 피질 혈관에서 고대비 혈전 시각화를 가능하게 합니다.

프로토콜

동물 샘플과 관련된 모든 절차는 적절한 동물 윤리 검토 위원회의 검토 및 승인을 받았습니다.

1. 뇌 조직의 생 체 외 근적외선 형광(NIRF) 혈전 영상

참

1. 수 후 두피를 제거하고 가위로 두개골을 대공에서 시상 봉합사 쪽으로 자릅니다. 밑에 있는 뇌의 손상을 피하면서 가위를 사용하여 절개된 두개골의 가장자리를 조심스럽게 들어 올려 두개골 천장을 제거하여 반구를 드러냅니다.
2. 근적외선 형광(NIRF) 영상에서 시각화해야 하는 COW(Willis) 동맥 원과 겹칠 수 있으므로 뇌 기저부의 시신경을 뇌 표면에 최대한 가깝게 잘라냅니다. 그런 다음 NIRF 혈전 영상을 위해 Y자형 '중대뇌동맥(MCA)/전대뇌동맥(ACA)/원위 내경동맥(ICA)'을 시각화하기 위해 소뇌 기저부를 부드럽게 압축하여 절단점을 노출시킨 후 원위 ICA를 뇌 표면까지 최대한 잘라냅니다(그림 1A).
3. 제거된 뇌 조직의 NIRF 이미징(여기/방출, 675/690nm, 1초 노출)을 수행하여 베이스가 위를 향하도록 하고(그림 1B, C), COW의 동맥에서 형광 표지된 혈전색전증을 시각화합니다(그림 1D). 그런 다음 뇌의 꼭짓점이 위를 향하도록 추가 이미징을 수행하여 피질 혈전색전증을 시각화합니다. 조직에 식염수 몇 방울을 떨어뜨려 뇌를 건조시키지 마십시오.

결과

그림 1: 대뇌 혈전색전증의 NIRF(Ex viv o Near-Infrared Fluorescent) 이미징 개요. (A와 B) 혈전색전성 뇌졸중이 있는 마우스로부터 대표적인 뇌 조직을 제거했습니다. 뇌를 제거할 때 원위 내경동맥의 중대뇌동맥(MCA) – 전대뇌동맥(ACA) 분기 부위(ICA, 파란색 화살표)에서 혈전색전증(빨간색 화살표)을 잃지 않도록 예방 조치를 취하십시오. ...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Machines NIRF
이미징 시스템	Roper-scientific, Tucson, AZ	Coolsnap-Ez
수술용 현미경	Leica Microsystems, 서울, 한국	EZ4HD
소프트웨어
이미지 J 소프트웨어	Wanye Rasband, NIH, USA	1.49d	이미징 분석
마이크로 겸자	Fine Science Tools, 밴쿠버, 캐나다	11253-27	Dumont L5
Micro 가위	Fine Science Tools, 밴쿠버, 캐나다	15000-03	Vannas 스프링
가위	Fine Science Tools, Vancouver, Canada	14084-08	8.5 cm
Black silk sture	Ailee, Busan, Korea	SK6071, SK728	6-0 and 7-0
Reagents
TTC	Amresco, Ohio, USA	0765-100g
C15 광학제			합성