Caenorhabditis elegans의 뉴런에서 세포내 칼슘 역학 이미징

초록

출처: Doser, R., et al. 생체 내 신경 칼슘 처리의 세포 내 이미징. J. Vis. 경험. (2023년)

이 비디오는 형질전환 Caenorhabditis elegans 균주의 복부 신경 코드 뉴런에서 세포내 칼슘 플럭스의 생체 내 이미징을 보여줍니다. 두 가지 별개의 칼슘 지표가 사용됩니다: 한 균주의 세포질 지표와 다른 균주의 미토콘드리아 지표. 뉴런은 자발적인 뉴런 활동 중 칼슘 플럭스를 반영하여 뉴런 세포질 및 미토콘드리아 내 형광 강도의 실시간 변화를 모니터링하기 위해 형광 현미경으로 관찰됩니다.

프로토콜

1. 이미징을 위한 벌레 준비

1. 한천 패드 준비
   1. 분자 등급 한천을 M9에 녹여 13mm x 100mm 유리 배양 튜브에 몇 초 동안 전자레인지에 돌려 10% 한천 3mL를 만듭니다.
      참고. 용융된 한천은 최대 1시간 동안 열 블록에 보관하거나 한천 패드가 필요할 때마다 신선하게 만들 수 있습니다.
   2. 각각 두 겹의 실험실 테이프가 있는 두 개의 추가 슬라이드 사이에 현미경 슬라이드를 놓습니다(그림 1A-i 참조).
   3. 1,000μL 피펫 팁(필터 제외)의 끝을 자르고 이를 사용하여 중앙 커버슬립에 작은 한천 방울을 피펫팅합니다(그림 1A-i).
   4. 한천 위에 있는 다른 슬라이드를 아래로 눌러 한천을 평평하게 만듭니다(그림 1A-ii).
   5. 냉각 후, 13mm x 100mm 유리 배양 튜브(그림 1A-iii)의 개구부를 사용하여 한천을 작은 디스크로 자른 다음 주변 한천을 제거합니다.
2. 웜 롤링 용액 준비
   1. M9에....

결과

그림 1: 복부 신경줄을 이미징하기 위한 C. elegans 장착 및 롤링.(A) 한천 패드를 준비하고 단일 웜을 롤링 용액으로 선택하는 단계의 그림. (B) 이미징을 위해 재배치되기 전의 웜 위치의 예. 빨간색 화살표는 커버슬립을 오른쪽으로 밀어 얻을 수 있는 웜의 오른쪽 롤이 필요함을 나타냅.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
100x/1.40 오일 대물렌즈	Olympus		UPlanSApo
10x/0.40 대물렌즈	Olympus		UPlanSApo
22 mm x 22 mm 커버 유리	VWR	48366-227
아가로스 SFR	VWR	J234-100G
CleanBench 실험실 테이블	제어 기능이 있는	TMC
필터 휠 또는 슬라이더	ASI		직경 25mm 필터용
FJH 185	Caenorhabditis 유전학 센터	FJH 185	벌레 균주
FJH 597	Caenorhabditis 유전학 센터	FJH 597	벌레 균주
GFP 대역 통과 방출 필터	Chroma		525 ± 50 nm (직경 25 mm)
ILE 레이저 결합기	Andor Technologies		4 레이저 라인
ILE 솔리드 스테이트 488 nm 레이저	Andor Technologies		50 mW
IX83 회전 디스크 공초점 현미경	Olympus		Yokogawa CSU-X1 회전 디스크
iXon Ultra EMCCD 카메라	Andor Technologies
저자동 형광 침지 오일	Olympus	Z-81226
MetaMorph	분자 장치		버전 7.10.1
현미경 컨트롤 박스	Olympus		IX3-CBH
Muscimol	MP Biomedical / Sigma	02195336-CF
폴리비드 마이크로스피어	폴리사이언스 주식회사	00876-15	0.094 μm
안정성 챔버	Norlake Scientific	NSRI241WSW/8H	15 °C로 설정
대 컨트롤러	ASI		필터 휠 제어 포함
표준 현미경 슬라이드	Premiere	9108W-E	75 mm x 25 mm x 1 mm
터치 패널 컨트롤러	Olympus		I3-TPC
Z-드리프트 교정기	올림푸스		IX3-ZDC2

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