교모세포종에 대한 면역적격 마우스 모델의 생물발광 이미징

초록

출처: Clark, AJ, et al. 교모세포종에 대한 면역적격 동물 모델의 생물발광 영상. J. Vis. 경험. (2016년)

이 비디오는 루시페라아제 발현 종양 세포와 루시페린을 사용하여 종양 성장을 비침습적으로 정량화하는 면역 적격 마우스 모델에서 교모세포종 진행을 추적하기 위한 생물 발광 이미징을 보여줍니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. GL261 종양 성장의 생물발광 이미징

1. 깨끗한 종이 타월에 다량의 소독제(0.05% 염화디메틸암모늄 용액)를 뿌립니다. 소독제를 적신 종이 타월을 사용하여 동물이 장치와 접촉할 이미징 챔버 내부의 검은색 시트, 노즈콘 및 칸막이를 철저히 닦습니다. 깨끗하고 마른 종이 타월로 모든 표면을 철저히 닦으십시오. 이것을 한 번 더 반복하고 5분 동안 기다립니다.
2. 이미징 스테이션을 초기화합니다.
3. 복강내 주사에 의해 200μl의 케타민/자일라진 및 100μl의 루시페린(D-루시페린 칼륨염, 150mg/kg)을 포함하는 300μl 혼합물로 마우스를 마취합니다.
4. 주사 후 10분 동안 기다렸다가 꼬리를 꼬집어 마우스가 완전히 마취되었는지 확인합니다. 이미징 시스템을 설정하려면 "발광", "자동" 노출 시간 및 "중간" 비닝을 선택합니다. 이미징 스테이션에 마우스를 놓고 "획득" 버튼을 클릭하여 이미지를 시작합니다. 주사 후 시간이 각 이미징 세션과 일치하는지 확인하십시오.
5. 이미지를 성공적으로 획득하면 이미지 창과 도구 팔레트가 나타납니다. 관심 영역(ROI) 또는 "ROI 도구"를 클릭하고 원 아이콘에서 "자동"을 선택합니다. ROI를 정의하려면 이미지의 신호 영역을 둘러싼 다음 ROI를 광자/초/sr/cm2 단위로 측정합니다.
6. 생쥐를 이미징 챔버에서 꺼내 걸을 수 있고 정상적인 활동을 유지할 때까지 모니터링합니다. 일반적으로 복구 시간은 약 15분입니다. 쥐가 마취에서 완전히 회복될 때까지 다른 동물과 함께 케이지로 돌아가지 마십시오.
7. 동물이 다음 증상을 나타낼 때까지 일주일에 두 번 생물발광 영상으로 종양 성장을 모니터링합니다: 체중 감소(이식 전 체중에 비해 20% 이상 감소), 식욕 부진(24시간 동안 완전한 식욕 부진), 부드러운 자극에 대한 지속적인 의도적인 반응 부족(약한 일어나려는 시도), 이때 안락사시켜야 합니다.
8. 생물발광 이미징의 첫날에 얻은 해당 판독값에 대해 각 날의 발광 값을 정규화합니다(그림 1A).
9. 통계 분석의 경우 Kaplan-Meier 추정기를 사용하여 생존 곡선을 생성하고 로그 순위 검정을 사용하여 생존 곡선 간의 차이를 비교합니다.

결과

그림 1. 루시페라제 발현은 생체 내 종양 성장 및 동물 생존에 영향을 미치지 않습니다. (A) 생물발광 모니터링은 두개내 GL261의 점진적인 성장을 보여줍니다. C57BL/6 마우스의 Luc(루시페라아제를 발현하는 GL261 교모세포종 세포) 종양. (B) Kaplan-Meier 생존 분석은 GL261(실선) 또는 GL261을 두개내로 이식한 마우스의 전체 생존율에 차이가 없음을 보여줍니다. Luc 셀(점선).

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
D-Luciferin, 칼륨염	Gold Biotechonology	LUCK-100	빛을 피한 곳에 보관
살아있는 이미지 소프트웨어	캘리퍼 생명 과학	적 연락처	없음
Xenogen Lumina	캘리퍼 생명 과학	견적 문의처	없음
Ketaset	Pfizer	NDC 0856-2013-01	대조 물질
자일라진	시그마-알드리치	23076-35-9	없음
28G 바늘(주사기 포함)	피셔	22-004-270	일명 인슐린 주사기
가열 패드	Dunlap	HP950
PDI 알코올 준비 패드	피셔	23-501-711

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