형광 거시경을 이용한 마우스 뇌에서 뇌척수액 수송의 생체 내 이미징

초록

출처: Sweeney, AM, et al. 형광 거시경을 이용한 온전한 마우스 두개골을 통한 뇌척수액 수송의 생체 내 이미징. J. Vis. Exp. (2019)

이 비디오는 형광 영상을 사용하여 마우스 뇌의 뇌척수액(CSF) 흐름을 시각화하는 과정을 보여줍니다. 형광 추적자를 수조 마그나(CM)에 주입하여 지주막하 및 혈관주위 공간을 통해 CSF와의 움직임을 추적할 수 있습니다. 타임랩스 이미징은 추적자의 여정을 포착하여 세동맥을 통해 뇌 조직으로의 분포를 강조합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 수조 마그나 캐뉼라, 헤드 플레이트 및 헤드 홀더 준비

1. 수술 전에 모든 수술 기구와 헤드 플레이트를 소독하십시오.
   참고: 형광 추적자는 수조 마그나 캐뉼라 삽입을 통해 CSF로 직접 전달됩니다.
2. 간단히 바늘 드라이버를 사용하여 30G x 12.7mm(1/2인치) 바늘의 끝을 3/4 아래로 부러뜨리고 바늘의 뭉툭한 끝을 폴리에틸렌 10(PE10) 튜브(약 45cm 길이)의 한쪽 끝에 놓습니다. 베벨만 PE10 튜브의 경계 밖으로 돌출되어 있는지 확인하십시오.
3. 다른 30G 바늘의 경사진 끝의 1/4을 부러뜨리고 플라스틱 루어 잠금 장치가 부착된 상태에서 나머지 바늘의 무딘 끝을 PE10 튜브의 다른 쪽 끝에 놓습니다.
4. 100μL 유리 주사기에 멸균 인공 CSF(aCSF: 126mM NaCl, 2.5mM KCl, 1.25mM NaH₂PO₄, 2 mM MgSO₄, 2 mM CaCl₂, 10 mM 포도당 및 26 mM NaHCO₃)를 채웁니다.
5. 주사기를 라인 끝에 부착하....

결과

그림 1. 경두개 거시적 영상. (A) 거시적 이미징 설정의 개략도. (B) 두개골에서 헤드 플레이트의 위치에 대한 등쪽 보기. 두정엽 뼈와 비강, 전두엽 및 두정엽 뼈가 모두 보입니다. (C) CSF 추적자가 나타나기 전에 이미징 중에 노출된 마우스 두개골은 온전한 두개골의 모든 두개골 봉합사를 명확하게 보여줍니다. 스케일 바: 1mm(.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
0.25% 부피바카인 HCl			University of Rochester Vivarium
100 μL 기밀 주사기 모델 1710 TLL, PTFE 루어 잠금	Hamilton Company	81020
A-M 시스템 치과용 시멘트 분말	피셔 사이언티픽	NC9991371
카프로펜			로체스터 대학교 비바리움
클로르헥시딘	Prevantics	B10800
CMOS 카메라	함마마츠	ORCA 플래시 4.0
헤드 플레이트	체스터 대학교	카탈로그 없음 #	로체스터 대학교 기계 공장에서 맞춤 제작
고온 소작	Bovie Medical Corporation	AA01
인스타 세트 가속기	Bob Smith Industries	BSI-151
이소플루란 - Fluriso	Vet One	502017	University of Rochester Vivarium
Ketamine			Strong Memorial Hospital 약국
Krazy Glue	Elmer's Products, Inc	카탈로그 # 없음, 의견의 링크 참조	https://www.amazon.com/Krazy-Glue-KG48348MR-Advance-Multicolor/dp/B000BKO6DG
마이크로포어 수술용 테이프	Fisher Scientific	19-027-761
파라포름알데히드	Sigma-aldrich	P6148
PE10 - 폴리에틸렌 .011" x .024" 피트당 피트, 100피트 연속	Braintree Scientific	PE10 100피트
펌프 11 엘리트 주입 전용 듀얼 주사기	하버드 기기	70-4501
PURALUBE VET OINTMENT	Dechra
PurSwab 코튼 팁 클리닝 스틱 피	셔 사이언티픽	22-029-553
리서치 매크로 줌 현미경	올림푸스	MVX10
심플 헤드 홀더 플레이트(마우스용)	나리시게 International USA Inc	MAG-1
일회용 바늘, BD 의료용	VWR	BD305106
멸균 알코올 준비 패드	Fisher Scientific	22-363-750
조정 가능한 LED	PRIOR 루멘 1600-LED
자일라진			로체스터 비바리움 대학교

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