의 실험 마우스 모델에서 질 접종 및 샘플 수집을위한 프로토콜 칸디다 질염

요약

평가에 사용되는 주요 기술 칸디다 질염이 설명되어 있습니다. 방법은 허리 림프절을 배수의 질 표본 및 lymphocytes의 급속한 컬렉션을하실 수 있습니다. 이 기술은 여성의 낮은 성기 요로에있는 다른 질병의 마우스 모델에 상승을 줄 수 있습니다.

초록

칸디다 종에 의한 Vulvovaginal 칸디다 증 (VVC)은, 그들의 생식 년 ^18,32-34 동안 달리 건강한 여성의 약 75 %에 영향을 미치는 낮은 여성의 성기 요로의 곰팡이 감염입니다. Predisposing 요인 항생제 사용, 통제 당뇨병 방해 생식 호르몬 수준에 임신으로 인해, 경구 피임약이나 호르몬 대체 요법 ^33,34을 포함합니다. 연간 세 개 이상의 에피소드로 정의된 재발성 VVC (RVVC)는없고 predisposing 요인 ³³ 여성의 8 %를 별도의 다섯 영향을 미칩니다.

VVC의 실험 마우스 모델은 설립 pathogenesis과 칸디다 ^{3,4,11,16,17,19,21,25,37에} 점막 호스트 응답을 연구하는 데 사용되었습니다. 이 모델은 또한 생체내 ^13,24 잠재적인 antifungal 치료를 테스트하기 위해 고용되었습니다. 모델 동물에 대한 선택 pseudoestrus의 상태로 유지합니다imal 칸디다 식민 / 감염 ^6,14,23. 이러한 조건에서, 주사 동물 개월 주 동안 질 곰팡이 부담을 감지합니다. 과거 연구는 면역 및 생리 특성 ^3,16,21에 상대적인 동물 모델과 인간 사이의 감염이 매우 높은 병렬을 보여줍니다. 차이점은, 그러나, 정상적인 질 식물로 칸디다의 부족과 생쥐의 중립 질 산도를 포함합니다.

여기에서 우리는 질 접종, 질 표본의 신속한 수집, 질 곰팡이 부담 평가 및 세포 추출 / 격리에 대한 조직 준비를 포함하는 마우스 질염 모델의 주요 방법의 일련 보여줍니다. 이것은 질 세척 유체, 곰팡이 부담, 그리고 배수 림프절의 백혈구의 수율의 성분에 대한 대표적인 결과는 다음입니다. anesthetics의 사용으로 세척 샘플의 길이 평가를 위해 같은 생쥐에 여러 시간 지점에서 수령 가능감염 / 식민지. 또한,이 모델은 정의된 호스트 조건 하에서 면역 연구를 허용, 감염을 시작하는 데 아무런 immunosuppressive 요원을 필요하지 않습니다. 마지막으로, 모델 및 각 기술은 여기에 잠재적으로 낮은 여성의 성기 요로 (바이러스성, 기생, 세균)과 각 지역 또는 체계 호스트 방어의 다른 감염증을 조사하는 방법론의 사용에 상승을 줄 수 소개했다.

프로토콜

1. 칸디다 albicans와 질 접종

1. 이전 접종에 사흘은 복부를 노출하기 위해 동물을 억제하면서, 낮은 복부에 subcutaneously β - estradiol의 0.1-0.5 MG를 포함 참기름 100 μl를 주입. 사출 사이트에서 누출을 최소화하기 위해 피부에 측면 5-10mm에 대한 바늘을 전진.
   아래 복부에있는 에스 트로겐의 피하 행정부는 성기 요로에 근접으로 인해이 모델에 최적입니다. 효과적인 복용이 마우스 변종, 연령 또는 에스 트로겐 유도체에 따라 다를 수 있습니다. CBA - J (H - 2 ^κ), C3H/HeN (H - 2 ^κ), C57BL / 6 (H - 2 ^B), Balb / C (H - 2 ^D)를 사용하여 이전 연구에서, DBA / 2 (H - 이 ^D), 연령 6-8 주가 SJL (H - ^2의) 마우스가 0.1 mg/100 μl가 효과가 있던 질 벽 농화에 의해 입증, 질 점액 및 감소상피 세포 sloughing 증가했습니다. 이상이 농도에서 에스 트로겐과 치료를 마우스는 칸디다와 일치하는 질 ....

토론

칸디다 질염의 실험 마우스 ^모델, 설립 역사적 ^{3,4,11,13,16,17,19,21,24} antifungal 요법을 테스트뿐만 아니라 칸디다에 점막 호스트 응답을 연구하기 위해 지난 몇 십년에 사용되고 있습니다 ^25,37. 프로토콜은 여기 효율적이고 덜 노동 집약적인 방법 통합, 그리고 칸디다 질염의 가장 최적화된 모델 시스템 중 하나가 날짜 설명한 것으로 나타날 제시. 이 기술은 질 표본의 곰팡이 부담과 컬렉션의 급속한 부량을 가능하게합니다. 또한, 이전의 연구는 생쥐 여러 haplotypic 변종 (N = 13) 테스트 및 다양한 시간 점 포스트 접종은 칸디다 ^2,6,41와 질 식민지에 곰팡이 부담 및 호스트 응답 변화의 유사한 수준을 보였다. 따라서,이 모델은 마우스 종자에 대한 제한이나 감염의 기간없이 기존의 프로토콜을 적용할 수 있습니다. 그러나, 하나는 인식해야한다는질 곰팡.......

재료

시약의 이름	회사	카탈로그 번호	댓글
여자 CBA / J 마우스	찰스 리버 연구소	01C38	나이 5-6주
칸디다 albicans (3153A)	병원성 곰팡이 국립 수집, 영국	NCPF3153
향유	시그마 - 올드 리치	S3547	사용하기 전에 미리 소독을 할 필요가 없다
Β - estradiol 17 - valerate	시그마 - 올드 리치	E1631	참깨 기름에 0.1 - 0.5mg
Phytone 펩톤	Becton 디킨슨	211,906	0.1 % 포도당과 보충
Trypan 푸른 솔루션	시그마 - 올드 리치	T8154
덱스 트로 오스 Sabouraud 한천	Becton 딕inson	211,584
Collagenase 유형 IV	시그마 - 올드 리치	C5138	0.25 %
Dispase	Invitrogen	17105-041	1.7 U / ML
와이어 메쉬 스크린	TWP	060X060S0065W36T	번호 60 메쉬, 스테인레스
행크스 '균형 소금 솔루션	Invitrogen	24020-117
CytoPrep 정착액	피셔 과학	12-570-10	얼룩 슬라이드를 보존
Papanicolaou는 EA - 65 얼룩	EMD 화학	7054X 85
Papanicolaou는 OG - 6 얼룩	EMD 화학	7052X 85
해리스 '명반의 hematoxylin	EMD 화학	638A - 85
Isoflurane	박스터 헬스케어	NDC 10019-773-60	isoflurane 기화기 또는 드롭 시스템에서 사용되는 마취 챔버 폐쇄