Orthotopic 마우스 뇌종양 모델의 조합 방사선 치료

요약

이 문서의 목적은 chemoradiation 연구를위한 orthotopic glioblastoma 모델의 사용을 설명하는 것입니다. 이 문서에서는 이온 주입, 세포 가공 불구하고 이동하고 intracranial 모델을 사용하여 마우스의 방사선 치료합니다.

초록

Glioblastoma multiforme의 (GBM) ¹ 가장 일반적이고 공격적인 성인 뇌종양입니다. 최근에는 거기에 종양이 침략의 역학에 대한 이해에 상당한 진전되어, 그리고 종양의 직접 했습니다만 접종은 생리학적으로 적절한 환경 ^2의 침략 과정을 관찰의 기회를 제공하고있다. 마찬가지로 지금까지 인간의 뇌종양에 대해서라면 현재 사용 가능한 orthotopic 모델은 복잡한 craniotomy 절차 ^3을 통해 종양의 고체 부분의 세포 현탁액 또는 주입의 stereotaxic 주입에 의한 중 설립된다. 우리의 기술 우리는 두뇌에 직접 이식하는 데 사용되는 세포 현탁액을 만들 조직 배양에서 세포를 수확. 수술 시간은 약 30 분 정도이며, 마우스가 지속 외과 비행기에있을 필요로 주사용 마취제가 사용됩니다. 마우스 Stoetling (그림 1)에 의해 만들어진 stereotaxic 지그에 위치합니다. 고물에응급실은 외과 영역이 청소와 준비가되어 있습니다, 절개가 만들어졌다, 그리고 bregma는 craniotomy의 위치를​​ 결정하기 위해 위치하고 있습니다. craniotomy의 위치는 오른쪽으로 2mm와 bregma에 주동이의 1mm입니다. 깊이는 두개골의 표면에서 3mm이며, 세포, 2 μl 매 2 분 속도로 주입하고 있습니다. 피부는 5-0 PDS로 봉합하고, 마우스는 가열 패드에 깨워 허용됩니다. 우리의 경험에서 세포주에 따라 치료는 수술 후 7~10일에서 자리를 차지할 수 있습니다. 마약 배달은 약물 성분에 따라 좌우됩니다. 방사선 치료를 마우스 anesthetized 있으며, 지그 만든 사용자 정의에 투입. 리드는 마우스의 시체를 커버하고 마우스만을 두뇌를 제공합니다. tumorigenesis와 GBM에 대한 새로운 요법의 평가 연구는 정확하고 재현성 뇌종양 동물 모델을 필요로합니다. 따라서 우리는 effectiven을 테스트, 두뇌의 microenvironment과 종양의 상호 작용을 연구하기 위해이 orthotopic 뇌 모델을 사용방사선와의없이 다양한 치료 요원의 ESS.

프로토콜

I. 셀 준비

1. 세포 이식되는 매 5 생쥐 한 80% 합류 225cm ³ 플라스크에 대해 10% FBS으로 DMEM의 합류로 성장하고 있습니다.
2. 세포의 미디어 벗어 대기음, 칼슘이나 마그네슘없이 PBS의 10 ML로 씻는다. 대기음 PBS 해제 세포.
3. 트립신 3 ML과 세포를 Trypsinize, 10-15 분 기다려야하고, 미디어의 15 ML에 트립신을 중화.
4. Pipet 50 ML 원추형으로 모든 세포와 미디어. 두 개의 커다란 flasks 한 50 ML 원추형으로 맞습니다.
5. 4 ° C.에서 7 분을위한 1,600 rpm으로 세포를 던가 완전히 뜨는 기음. 차가운 PBS의 10 ML에 세포를 Resuspend, 가볍게 아래로 pipetting 및하여 세포를 헹굴. 셀을 펠렛은 PBS로 균일하게 혼합되어 있는지 확인하십시오. 서스펜션은 구름이어야합니다.
6. 현재 셀 카운트는 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날 카운터를 사용하여 수행됩니다. 세포는 4 ° C.에서 7 분을위한 1,600 rpm으로 다시 centrifuged있다
7. 세포의 2 ^차 원심 분리 등 후PBS 1 ML의 해적 모든 PBS와 resuspend.
8. 세포는....

토론

이러한 glioblastoma multiforme와 같은 악성 프로그램 gliomas은 가장 일반적인 기본 뇌종양을 대표하고 음침한 예후에게 ⁴ 있습니다. GBM에 의해 영향을 환자의 생존은 수술, 방사선 및 화학 요법 ^5의 진보에도 불구하고 (9-12 즉, 몇 달 후 진단) 지난 10 년 동안 거의 변함없이 남아있다. 세포가 인간의 gliomas의 histological 기능에 최대한 가깝게 유사합니다; 예측 가능한 성장이 있어야 glioma 치료 연구를위한 적절한 모델의 특징은 재현할 종양의 위치와 성장 세포가 상대적으로 이산 종양 등이 포함되어야 종양의 비율은, 조직 문화 모델에서 종양 성장 능력 경비 ⁶ 줄이기 위해 작은 동물에 있어야합니다. 효과적인 치료가 밀접하게 새로운 치료를 테스트하고 widespr의 분자 기준의 정확한 이해를 제공하기 위해 인간 GBM의 특성과 유사한 실험 모델에 의존EAD glioma의 침략 ^7. 뇌 종양의 생물학에.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
연구실 표준 Stereotaxic Instrutment	마우스 및 쥐 어댑터를 Stoelting
Betadine	백퍼센트 EtOH
70% EtOH	50 % 아세톤
6 "Q-팁	알코올 면봉
해밀턴 주사기 80,008	Ethicon 5-0 PD
1701 SN 31-33G / 1 "/ PT3 바늘	한 ML의 주사기
25G 바늘	생리대
인공 눈물 연고	아주 좋은 스쳐 영구 마커