Method Article

Murine 외면적인 림프절 외과

DOI:

10.3791/3444

⸱

May 21st, 2012

 , 
1Maisonneuve-Rosemont Hospital Research Center, 2Department of Microbiology and Immunology, University of Montreal, 3Department of Medicine, University of Montreal

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

같은 마우스 내에서 시간에 따른 면역 반응의 진행을 수행하려면, 임파선이 순차적으로 수술로 제거할 수 있습니다. 여기서는이 기술을 수행할 수있는 방법에 대해 설명합니다.

Abstract

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백신, 감염이나 종양에 대한 면역 반응의 진행을 이해하는 면역학 분야에서, 반응은 종종 시간이 지남에 따라합니다. 마찬가지로 림프구 항상성의 연구는 시간 과정 실험이 필요합니다. 같은 마우스 내에서 이러한 연구를 수행하는 것은 실험적 다양성뿐만 아니라 사용하는 마우스의 개수를 줄이기 위해 이상적입니다. 혈액 금단 시간 과정 실험의 성능을 가능하지만, 그것은 단지 lymphocytes 순환에 대한 정보를 제공하고 세포 1-4 제한된 수의를 제공합니다. 몸 전체 순환과 림프 노드에 거주하는 lymphocytes 서로 다른 성질을 가지고 있기 때문에 두 위치를 검토하는 것이 중요합니다. 수술에 의한 림프절의 연속적인 제거는 면역 반응이나 시간의 경과에 같은 마우스의 면역 세포 확장을 수행하는 독특한 기회를 제공합니다. 또한이 기술은 PE에 대한 충분한입니다 림프절 당 1-2x10 6 셀 사이에 듭니다phenotypic 특성화 및 / 또는 기능 assays를 rform. 순차 림프절 수술이나 lymphadenectomy이 성공적으로 우리와 다른 5-11에 의해 사용되었습니다. 여기서는 상완과 사타구니 임파선이 anesthetised 마우스의 피부에 작은 절개를함으로써 제거할 수 방법에 대해 설명합니다. 수술은 외면하고 신속하게 이루어지기 때문에, 마우스가 매우 빠르게 복구 잘 치유하고 과도한 통증을 경험하지 않습니다. 매초마다 하루 시간 과정 실험 허용 하나 또는 두 개의 림프절을 적출하는 것이 가능합니다. 이 기술은 시간이 지남에 임파선의 특성 노드 거주 lymphocytes를 공부하기 때문에 적합합니다. 이 방법은 여러 가지 실험 설계에 적합하며 우리는 많은 실험실은 순차 림프절의 수술을 혜택을 누릴 것이라고 믿습니다.

Protocol

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1. 수술 전 준비

마우스는 동물 복지 지침에 캐나다 문화원에 따라 취급되었다.

  1. 케타민을 / xylazine (300분의 150 밀리그램 / kg, IP)의 주입에 의해 또는 isoflurane의 흡입 (2 %, 1L 산소)에 의한 마취시키다 생쥐. 가능한 경우는 마취 시간과 깊이 나은 제어를 허용로 isoflurane를 사용해야합니다. 또한 산소는 동물의 생리 기능을 지원하는 동시에 관리합니다. 또한, isoflurane 직접 폐에 의해 제거되며 따라서 간장이나 신장 대사가 필요하지 않습니다.
  2. 또는 다른 진통제 - buprenorphine를 (0.1 밀리그램 / kg, SC 0.05) 주사.
  3. (isoflurane을 사용하는 경우) 안구 건조를 피하기 위해 수술 전에 마우스 눈을에 연고를 바릅니다.
  4. 마우스가 앞발을 곤란하고 꼬리를 압연하여 자고 있는지 확인합니다. 마우스가 반응하지 않는 경우 수술로 진행합니다.

2. 외과

  1. 그 측면에 마우스를 올려.
  2. 당신 incisio을 수행합니다 지역을 집중하다N, 당신이 적출하고 싶습니다 후면에 따라.

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Discussion

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우리는 많은 실험적인 시스템에 적용할 수있는 에선 수술의 프로토콜을 설명했습니다. 면역 반응 또는 면역 세포 항상성를 수행하는 것이 매우 유용하지만,이 기법은 몇 가지 제한 사항이 있습니다. 첫째, 적당히 LNs을 수확 할 수 있습니다. 둘째, 공부 면역 반응은 조직의 산물이거나 외면 사타구니 또는 상완 (피부 배수) LNs에서 발생합니다. 마지막으로, 수확 세포의 숫자 에선 제거, 절대 셀 참조가 필요한 경우 실험적인 다양성에 기여할 수있는 기술적인 제한의 품질에 의해 영향을받습니다. 에선 크기가 다양한 실험 조건간에 차이가없는 경우 단, 표적 세포의 비율 자체에 특히 적합하고 정확한 정보를 제공할 수 있습니다. 다행스럽게도, 일단 기술이 잘 각 하냐구요에서 높은 재현성 휴대 전화 번호 있도록, 하냐구요 제거 개선의 품질을 마스터합니다. 우리는이 몇 가지 한계에도 불구하고 에선 수술이 공부하는 주요 이점을 제공한다고 믿고면역 반응의 진행. 첫째, 시간이 지남에 면역 반응은 실험적인 다양성뿐만 아니라 사용된 생쥐의 수를 감소,.......

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

우리는 Sylvie의 Lesage 및 프로토콜의 중요한 독서에 대한 모든 실험실 구성원 감사드립니다. 이 작품은 건강 연구 (CIHR)의 캐나다 연구소에서 교부금 (걸레-77545)에 의해 지원되었다. 나탈리 Labrecque는 FRSQ 수석 장학금의 지원과 멜리사 매튜는 NSERC 알렉산더 그레이엄 벨 캐나다의 대학원 장학금을 받고있다.

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
시약 이름 회사 카탈로그 번호 댓글
파인 패턴 프리미엄 집게를 Graefe 하버드 장치 52-2144 매우 구부러져, 10cm (4), 0.8 밀리미터 팁
미셸 클립 집게 적용 및 제거 하버드 장치 52-3779 12.5 cm (5)
미셸 클립 100 하버드 장치 52-3746 7.5-1.75 mm
Temgesic (Buprenorphine 염산염) Schering-북두칠성
Vetalar (케타민을 하이드로 클로라이드) Boniche 동물 건강 관리 DIN : 01,989,529
Rompun (Xylazine) 바이엘 DIN : 02,169,592
Isoflurane 애보트 DIN : 02,032,384
Hypotears의 눈 연고 노바티스 Ophtalmics DIN : 02,133,288
Baxedin (이소 프로필 알코올의 Clorhexidine 글루 콘 산 2퍼센트 70 %) 오메가 L0000017 DIN : 02,251,477

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zehn, D., Lee, S. Y., Bevan, M. J. Complete but curtailed T-cell response to very low-affinity antigen. Nature. 458, 211-214 (2009).
  2. Vezys, V. Memory CD8 T-cell compartment grows in size with immunological experience. Nature. 457, 196-199 (2009).
  3. Zho....

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