등의 연결을 dendrites 같은 복잡한 세포 모양은, 개발하는 동안 달성하는 방법 이해하기 위하여, 정확하게 분석 미세 소관 기관 수 있도록 중요합니다. 여기 돌기 arborization의 신경 감각 dendrites의 미세 소관 조직, 기관, 근육을 검토하는 강력한 immunohistological 라벨링 방법을 설명 및 기타 Drosophila 유충 바디 벽 조직.
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방법 논문
Immunohistological 감각 신경 세포의 Dendrites에 Microtubules의 라벨링, Tracheae, 그리고 근육에 Drosophila 유충 바디 벽
이 논문에서
요약
초록
복잡한 세포 형태의 차이가 달성되는 방법을 이해하기 위하여, 정확하게 미세 소관 조직을 수행하는 것이 중요합니다. Drosophila 애벌레 바디 벽이 세포와 조직 morphogenesis을 연구하는 모델 몇 가지 세포 유형이 포함되어 있습니다. 예를 들어 tracheae는 튜브 morphogenesis 1, Drosophila의 유충의 감각 뉴런은 일반의 해설과 모수 석의 차별화 2-5와 퇴보 6 신경 세포 수준의 특정 메커니즘에 대한 기본 시스템이되고있는 돌기 arborization (DA)를 검사하는 데 사용됩니다 .
dendrite 가지의 모양은 신경 세포 클래스 사이에 크게 다릅니다, 심지어는 하나의 신경 세포 7,8의 다른 지점 사이에 있습니다. DA의 뉴런의 유전자 연구는 차동 cytoskeletal 조직이 돌기 지점 모양 4,9-11의 형태학의 차이를 기초 수있는 것이 좋습니다. 우리에게 강력한 면역 라벨 방법을 제공DA 감각 신경 dendrite 아버의 생체내의 미세 소관 기관 (그림 1, 2, 영화 1) ssay. 이 프로토콜은 먼저 instar의 유충의 해부와 immunostaining, 활성 감각 신경 세포의 dendrite의 파생물 및 분기 조직 12,13을 발생하는 단계를 보여줍니다.
감각 뉴런을 얼룩뿐만 아니라,이 방법은 강력한 근육의 미세 소관 조직의 라벨 (영화 2, 3),기도 (그림 3, 영화 3), 기타 신체 벽의 조직을 실현하고 있습니다. 그런 메커니즘을 조사하면 신체 벽에 현장에서 미세 소관 조직을 분석하고자 조사에 대한 가치가 컨트롤 조직 및 세포 모양.
프로토콜
1. 시약의 준비
시작하기 전에주의 사항 : 해부 및 immunohistochemical 얼룩은 자기 챔버에서 수행되고 유충은 특별히 모양의 곤충 핀을 사용하여 넘어뜨린 것입니다. 자기 챔버 건설, 이들 핀의 준비에 대한 자세한 지침은 관련 참고 문헌 14,15에서 찾을 수 있습니다. 간단히, 1x1cm의 사각형 구멍은 자성 시트 및 소형 챔버를 만들기 위해 시트의 뒤쪽에 부착된 coverslip으로 절단됩니다. 챔버의 측면은 에폭시 접착제로 봉인되며이 접착제는 챔버가 사용하기 전에 70 % 에탄올로 여러 번 씻어입니다 설정한 후. 해부의 곤충 핀은 필요한 모양 벤딩하여 준비하고 금속 탭을 14,15에 붙어 있습니다. 또는 금속 탭을 우리는 컷오프 노란색 팁 만든 핸들 거꾸로 플랫 헤드 스틸 그리기 핀을 사용합니다. 이 자기 챔버 배열의 사용이 가까이 제어 ove 수 있습니다R 핀 위치와 조직 해부 동안 스트레칭.
DA 뉴런의 조사관의 다른 하위 집합에 리포터 유전자 발현을 유발하기 위해서는 몇 가지 Gal4 행 (시모노 및 동료 16 요약)를 사용할 수 있습니다. 이 라인의 대부분은 공공 주식 센터....
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토론
그것을 달성하는 방법 복잡한 세포 모양 이해하기 위해서는 정확하게 분석 미세 소관 기관 수 있도록 중요합니다. 여기 돌기 arborization의 신경 감각 dendrites의 분석 미세 소관 기관에 대한 강력한 immunohistological 라벨링 방법을 설명합니다. 얼룩 감각 신경뿐만 아니라,이 방법은 기관, 근육 및 다른 신체 벽면 조직의 강력한 immunohistological 얼룩을 구현합니다.
우리는 DA의 뉴런의 개발 감각 dendrites의 미세 소관 조직을 검사하기 위해이 프로토콜을 사용합니다. 이러한 dendrites가 부상을 입거나 스트레스 25에 민감하고, 해부 23 시작 이후 빠른 속도로 다운 휴식. 해부 다섯 분 이내에 실시하여야한다. 기관 및 기타 바디 벽의 조직에 Microtubules 더 안정됩니다. 이 프로토콜은 신경근육학 접합 14,15의 분석을 위해 애벌레 필레 준비를 사용하는 .......
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공개 사항
우리는 공개 아무것도 없어.
감사의 글
우리는 자금에 대한 RIKEN 주셔서 감사합니다. P10 - Gal4은 알랭 빈센트 (Université 폴 Sabatier, 툴루즈, 프랑스)의 일종 선물했다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약의 이름 | 회사 | 카탈로그 수 | 댓글 (선택 사항) |
| 집게 | 뒤몽 | 11251-20 | |
| Microscissors | FST | 15000-08 | |
| 마우스 방지 α - tubulin (복제 : DM1A) | 시그마 | T9026 | 희석 1,000분의 1 |
| 마우스 방지 Futsch (복제 : 22C10) 표면에 뜨는 | 발달 연구 하이 브리 도마 은행 | 22C10 | 희석 1,000분의 1 |
| 쥐 방지 CD8 (복제 : 5H10) | Caltag | MCD0800 | 희석 1,000분의 1 |
| 알렉사 형석 488 안티 - 마우스 IgG | Invitrogen | A - 11001 | 희석 5백분의 1 |
| Cy3 안티 쥐 IgG | 잭슨 Immunoresearch | 712-166-150 | 희석 200분의 1 |
참고문헌
- Schottenfeld, J., Song, Y., Ghabrial, A. S. Tube continued: morphogenesis of the Drosophila tracheal system. Curr. Opin. Cell. Biol. 22, 633-639 (2010).
- Gao, F. B., Brenman, J. E., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Genes regulating dendritic outgrowth, branching, and routing in....
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재인쇄 및 허가
