예 생체내 준비는 혈관 vasoactive 자극에 반응하며 수동 벽 기계를 통해 기본적인 구조적 특성의 평가 모두의 심문에 대한 가장 큰 gracilis 근육 저항 arterioles의 분리에 대해 설명되어 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
절연 microvessel 준비는, 따라서 관류 저항 1-5 여러 요인 공헌 제어하는 혈관 직경의 전형을 허용 전직 생체내 준비이며. 이것은 처음. 15 몇 년 전 우치다 외 의해 설명, 대형 측정에서였다 고전 실험 준비입니다. 이것은 초기 설명은 광범위 주로 버지니아 6-8의 대학에서 박사 브라이언 Duling의 실험실에서 수정되고 향상되었습니다 기법에 대한 기초를 제공하고, 우리는 다음 페이지에서 현재의 접근 방식을 제시. 이러한 준비는 특히 선택의 microvessel 같은 시궁창에서 gracilis의 arteriole을 참조되지만, 기본적인 준비가 쉽게 종의 9-13 전역의 거의 모든 다른 조직이나 기관으로부터 격리 선박에 적용할 수 있습니다. 고립된 microvessels의 기계식 (즉, 차원) 변경 사항을 쉽게 평가할 수생리학 (예 : hypoxia, intravascular 압력, 또는 전단) 또는 pharmacological 도전, 그리고 손상에 통합 반응 구성된 기계론의 요소로 통찰력을 제공할 수 있지만 예전의 생체내, 조직의 광범위한 배열에 대응 인치 이 방법의 중요성 또한 intravascular 압력 (myogenic), 자율 innervation, hemodynamic 포함한 기타 출처로부터 기부금의 많은 컨트롤을 허용하는 동시에 그것이, microvessel 직경의 통합 규제에 영향 손쉬운 조작을 허용하는 것입니다 ( 예를 들어, 전단 응력), 내피 의존하거나 독립적인 자극, 호르몬, 그리고 parenchymal 영향, 부분적인 목록을 제공합니다. 적절한 실험 조건에서하고 적절한 목표, 이것은 생체내 또는 쉽게 광범위한 체계적인 변수의 손쉬운 제어를 허용하지 않는 현장 조직 / 기관의 준비에서 이상의 장점이 될 수 있습니다.
mA이 준비의 조 제한은 본질적으로 그 강점의 결과입니다. 정의함으로써, 이들 선박의 동작이 혈관 저항의 규정에 가장 중요한 참여자의 많은과 같은 신경 체액, 신진 대사 등을 포함하여 제거된 조건에서 연구되고 수사관들은 피하기 위해 오버 경고합니다 통역이 준비를 활용 수집되는 데이터의 추정. 이러한 준비에 관해서는 관심의 또 다른 중요한 영역이 같은 내피 안감이나 혈관 평활근 세포와 같은 구성 요소를 손상하는 것은 매우 쉬울 수있다는 것입니다, 오류 등 그 변수 소스를 소개하실 수 있습니다. 그것은 강력하게 개인 조사는 실험 시작시와 정기적으로 프로토콜의 과정에 걸쳐 모두, 준비의 품질을 보장하기위한 적절한 측정을 활용하는 것이 좋습니다.
프로토콜
1. 실험에 앞서
- 실험 하루 전에 기차역에 적합한 크기의 유리 모세관 튜브는 micropipettes (중 수평 또는 수직으로 끌어당기는 사용할 수있다)에 연루된다. 우리가 일반적으로 50-150 μm의 사이에 직경 범위를 사용하더라도 팁 직경은 쉽게, 고립되는 혈관에 따라 조정할 수 있습니다. 이러한 그러면 부탄 화염 이상 microvessel 역 아래의 가열을위한 적절한 구성에 부러 졌지 만요. Micropipette 팁은 물리적으로 문제의 microvessel 위해 (미세 집게 포함) 대략 직경에 고장 수 접지 또는 특정 응용 프로그램에 필요한 적절한 conformations에 광택.있다 이러한 절차에 대한 광범위하고 우수한 검토를 위해, 독자는 데이비스 외로 이동합니다. 16. 두 micropipettes 그때 microvessel 챔버 용 피펫 홀더에 야당에 배치됩니다. 이들은 지향되어야 그러한 그 팁선박 챔버 내에서 동일한 수직 및 수평면에 있습니다.
이 원고 (그림 1 및 2)에 사용 microvessel 챔버 (위스콘신 의과 대학에서 생리학의학과 씨를 데이비드 Eick 의해 세워진 정의는 하나입니다 http://www....
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토론
이러한 일반적인 기술은 쉽게 대부분의 조직에 적용할 수 있지만 제시 프로토콜, 골격 근육 microvessel의 분리, 제거 및 이중 cannulation을 설명합니다. 현재 원고 내용은 용어 "arteriole"도 주요 장기에 재관류 저항의 규정에 기여 아니면 휴식 활성 톤 미만의 직경 70-120 μm의 사이에 이르기까지 저항 혈관을 설명하기 위해 저자가 사용되었습니다 조직.
일부 수정이 시스템은 특정 탐정 여러 응용 프로그램에 장착할 수 있으며, 쉽게 (예 : 멤브레인 가능성 17 결정에 대한 transmembrane 전극의 사용) 깊이있는 실험에 더 많은를 제공하기 위해 추가적인 기술의 결합을 허용합니다. 기본적인 준비에 중요한 단계는 항상 선박 cannulate하는 데 사용되는 유입과 유출 pipettes이 잘 일치하는 할려고 명확 유지하고, 허용되는흐름과 압력이 쉽게 이해되는 방식으로 유지되어야합니다. pipettes 조각이 분.......
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공개 사항
관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.
감사의 글
이 작품은 미국 심장 협회 (EIA 0740129N)와 NIH T32 HL90610에 의해 지원되었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약 및 장비 | 회사 | 덧글 / 카탈로그 # | |
| 선박 상공 회의소 | 사용자 정의 | 데이브 Eick (MCW) | |
| 온수 순환 물 목욕 | PolyScience 및 Haake | Haake DC 10 | |
| Pipets | 프레데릭 Haer & (주) | 모세관 튜브 2.0 mm OD X 1.0 mm ID (27-33-1) | |
| 압력 모니터 | 세계 정밀 계측기 | ||
| 물의 외피 저수지 | 사용자 정의 | ||
| 외부 광원 | 세계 정밀 계측기 | Novaflex | |
| Pipet의 풀러 | MicroData 인 스트 루먼트 | PMP102 Micropipet 풀러 | |
| 전체 결점수술 도구, 표준 | 파인 과학 도구 | 뒤몽 | |
| 울트라 파인 집게 | 파인 과학 도구 | Inox # 5 | |
| 실크 봉합사 스레드 | Ethilon | # 10-0 또는 9-0 | |
| 스테레오 현미경 | 올림포스 산 | 올림푸스 SZ-11 | |
| 아날로그 비디오 캘리퍼스 | Boeckeler | 비아 컨트롤러 (비아-100) | |
| 고해상도 아날로그 카메라 | 파나소닉 | GP-MF 602 | |
| 산소 탱크 | 지역 | 21 % 밸런스 질소와 5 %는이 밸런스 질소를 공동 | |
| 관류 | Tygon | ||
| 펌프 배수 | 콜 Parmer 악기 (주) | ||
| 수정된 생쥐 PSS | 아래의 제조법을 참조하십시오 | ||
| 반 Breemen의 이완 PSS | 아래의 제조법을 참조하십시오 |
표 1. 수치로 표시 절연 microvessel 스테이션 설정의 주요 구성 요소의 목록입니다.
| 수정된 생쥐 PSS 제조법 | PSS 2 리터를 만들려면 | 20X 소금 증권 (2L) | 20X 버퍼 증권 (2L) |
|---|---|---|---|
| NaCl | 278.0 g | ||
| KCl | 14.0 g | ||
| MgSO 4 7H 2 O | 11.5 g | ||
| CaCl 2-H 2 O | 9.4 g | ||
| NaHCO 3 | 80.8 g | ||
| EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) | 0.4 g | ||
| 아뇨 2 PO 4 | 0.28 g | ||
| 포도당 | 1.98 g | ||
| 20x 소금 증권 | 100 ML | ||
| 20x 버퍼 증권 | 100 ML | ||
| 증류수 | 1800 ML |
표 2. 격리된 microvessel 프로토콜에서 사용되는 표준 생리 식염수 (PSS)를위한 레시피.
레시피에 대한 의견 : 소금 주식 2 패와 버퍼 증권 2 패하십시오. 이 C사용하지 않는 경우 냉장 있겠지만 잘 종종 PSS를 준비하기 전에 그들을 흔들어. 추가 재료는 최종 PSS의 준비 시점에 추가됩니다.
| 반 Breemen의 이완 PSS | PSS 2 리터를 만들려면 | 20X 소금 증권 (1L) | 20X 버퍼 증권 (1L) |
|---|---|---|---|
| NaCl | 107.4 g | ||
| KCl | 7.0 g | ||
| MgSO 4 7H 2 O | 5.76 g | ||
| MgCl 2 6H 2 O | 81.32 g | ||
| NaHCO 3 | 40.4 g | ||
| 동부 서머 타임 | 0.2 g | ||
| EGTA | 15.22 | ||
| 아뇨 2 PO 4 | 0.28 g | ||
| 포도당 | 1.98 g | ||
| 20x 소금 증권 | 100 ML | ||
| 20x 버퍼 증권 | 100 ML | ||
| 증류수 | 1800 ML |
표 3. 제로 활성 톤의 조건 하에서 절연 microvessel 프로토콜에 사용되는 반 Breemen의 이완 생리 식염수 (PSS)를위한 레시피.
레시피에 대한 의견 : 소금 증권 1 패 만들기버퍼 증권의 ND 1 패. 이들은 사용하지 않는 경우 냉장 있겠지만 잘 종종 PSS를 준비하기 전에 그들을 흔들 수있다. 추가 재료는 최종 이완 PSS의 준비 시점에 추가됩니다.
참고문헌
- Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome. Microcirculation. , 1-18 (2009).
- Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C.
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