우리는 중간 entorhinal 피질 (멕)의 지느러미-복부 축을 유지 뇌 조각의 준비와 electrophysiological 레코딩을위한 절차를 설명합니다. 위치의 신경 인코딩 멕 내에서 지느러미-복부 조직을 따르기 때문에,이 절차는 탐색 및 메모리에 중요한 세포 메커니즘 조사를 용이하게합니다.
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방법 논문
설치류 중간 Entorhinal 피질의 지느러미 - 복부 기관의 조사를 위해 Parasagittal 조각의 작성
이 논문에서
요약
초록
두뇌의 계산들은 시냅스 입력을 적절하게 응답 뉴런에 의존합니다. 뉴런들은 보완하고 그들이 시냅스 입력에 응답하는 방법을 결정 멤브레인 이온 채널의 배포판에 다릅니다. 그러나 이러한 세포 특성과 동물 행동에의 연결을 함수 간의 관계가 잘 이해되지 않습니다. 이 문제에 대한 하나의 접근 방식들은 인코딩 정보 또는 계산을 향해 개별 뉴런지도의 위치들이 1을 수행하는 topographically 조직 신경 회로를 조사하는 것입니다. 이 접근법을 사용하는 실험은 감각과인지 회로 2,3 년 정보 인코딩을 밑에있는 시냅스 반응의 튜닝을위한 원리를 제안합니다.
중간 entorhinal 피질 (멕)의 지느러미 - 복부 축에 대한 공간적 표현의 지형 조직은 세포 메커니즘과 계산 사이의 관계를 확립하는 기회를 제공하고 전공간 인식을위한 mportant. 쥐 멕의 계층 II에 뉴런은 사용 위치 필드에게 4-6를 해고 그리드와 같은 인코딩. 점차적으로 더 많은 복부 자세에서 뉴런이 거리보다 1m로 증가하는 반면 멕의 지느러미 위치에서 찾을 뉴런에 격자를 형성하는 개별 발사 필드 간의 거리는 30cm의 순서에 있습니다. 몇몇 연구들은 이러한 세포 특성이 공간적 계산 2,7-10을 위해 중요하다는 것을 제안하고, 그리드 해고 필드 사이의 간격처럼, 또한 그들의 지느러미 - 복부 위치에 따라 다르다, 그렇게 멕의 계층 II에 뉴런의 세포 특성을 발표했습니다.
여기 멕 뉴런의 biophysical 및 해부 학적 특성의 지형 조직의 멕있게 조사 지느러미-복부 정도를 유지하고 뇌 조각의 준비와 electrophysiological 레코딩을위한 절차를 설명합니다. 확인된 N의 지느러미-복부 위치그것이 슬라이스의 정확한 지느러미-복부 위치에 대한 기준점을 확립하기 어려운이기 때문에 해부 학적 경계표에 상대적 eurons는, 멕 7,8,11,12의 수평 조각을 사용하는 프로토콜과 정확하게 설정할 어렵습니다. 우리가 설명하는 절차는 멕뿐만 아니라 분자 그라디언트 2,10의 시각화의 지느러미 - 복부 축을 따라 기록된 세포의 위치를 정확하고 일관성있는 측정을 가능하게합니다. 절차는 성인 쥐 (> 28일)와 함께 사용하기 위해 개발되었습니다 성공적으로 1.5 년 이전에 쥐가 함께 근무하고있다. 조정을 통해 그들은 어린 쥐 또는 다른 설치류 종과 함께 사용할 수 있습니다. 준비 및 측정의 표준 시스템이 해당 지역의 셀룰러 및 microcircuit 속성의 체계적인 조사를 도움이됩니다.
프로토콜
1. Parasagittal 슬라이스 준비
1.1 대뇌 반구를 해부
모든 동물 실험은 지역 윤리적 검토와 국가의 규정을 따라야합니다. 여기에서 설명한 실험의 경우, 작품은 영국의 동물 (과학적 절차) 법 1986 준수. 우리는 정기적으로 두뇌를 제거하기 전에 마우스를 안락사시키려는 마취없이 경추 탈구를 사용합니다. 또는 마우스들은 불치병 anesthetized 될 수 있지만,이 경우는 마취의 선택의 연결 속성에 영향을 미치는지 확인 할 수 있습니다.
마우스에서 두뇌를 제거하고 추위에 즉시 장소 (4-8 ° C) 인공 뇌척수 (ACSF)을 (용액 조성을위한 표 1 참조) 절삭하는 carbogen (95% O 2 5 % CO 2)와 채도로 부풀어 오른 모양이었다.
3 분 최대 후에 신중하게 C에서 두뇌를 제거utting ACSF는 주걱을 사용하여 부드럽게 커팅 ACSF (그림 1A)로 moistened되었습니다 거름종이를 향해 수직 위치 (위쪽으로 향하게 지느러미 쪽)에 넣습니다.
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토론
우리가 상세하게 여기 멕의 지느러미-복부 정도를 유지 parasagittal 슬라이스 준비 생산을위한 절차를 설명했습니다 지느러미-복부 조직을 따라 멕 회로 특성 조사를 용이하게합니다.
중요 단계
동물의 두뇌를 제거하고. 두뇌에 exerting 압력을 피하기 위해 특별한주의를 기울입니다. 이것은 뇌의 급격한 제거보다 더 중요하다.
칼자국. 슬라이스는 단단히 잡고 챔버 바닥에 붙어 있어야합니다. vibratome는 Z 축 진동 <2 μm의가 있어야하고 높은 진폭과 낮은 속도 설정과 함께 사용해야합니다. 최적의 설정은 모델간에 다를 수 있으며, 시행 착오에 의해 설립되어야합니다.
용액의 온도를 모니터링. 우리는 슬라이스 품질이 절단 도중.......
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공개 사항
공개하는 아무것도.
감사의 글
우리는 그들의 지원을 위해 다음과 같은 감사 위치 : 연방 장학위원회 영국 기금 (HP), EPSRC (HP), BBSRC (MFN) 및 유럽 연합 (EU) 마리 퀴리의 작업 (MFN).
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 | ||
|---|---|---|---|---|---|
| 절단 ACSF (㎜) | 표준 ACSF (㎜) | 내부 용액 (㎜) | CASNumber | 공급 업체 카탈로그 번호 | |
| NaCl | 86 | 124 | 7647-14-5 | 시그마 S9888 | |
| 아뇨 2 PO 4 | 1.2 | 1.2 | 13472-35-0 | 시그마 71,505 | |
| KCl | 2.5 | 2.5 | 10 | 7447-40-7 | 시그마 P3911 |
| NaHCO 3 | 25 | 25 | 144-55-8 | 피셔 S/4240 | |
| 포도당 | 25 | 20 | 50-99-7 | 시그마 G5767 | |
| 자당 | 75 | 57-50-1 | 시그마 S5016 | ||
| 칼슘CL이 | 0.5 | 2 | 10043-52-4 | VWR 190464K | |
| MgCl 2 | 7 | 일 | 2 | 7786-30-3 | 시그마 63,020 |
| K 글루 콘 산 | 130 | 299-27-4 | 시그마 G4500 | ||
| HEPES | 10 | 7365-45-9 | 시그마 H3375 | ||
| EGTA | 0.1 | 67-42-5 | 시그마 E4378 | ||
| 나이 ATP | 2 | 34369-07-8 | 시그마 A7699 | ||
| 나이 GTP | 0.3 | 36051-31-7 | 시그마 G8877 | ||
| NaPhospho - 크레아틴 | 10 | 19333-65-4 | 시그마 P7936 | ||
| Biocytin (옵션) | 2.7 | 576-19-2 | 시그마 B4261 |
표 1. ACSF 표준 ACSF와 K-글루 콘 산 내부 솔루션 요리법을 절단.
참고문헌
- O'Donnell, C., Nolan, M. F. Tuning of synaptic responses: an organizing principle for optimization of neural circuits. Trends Neurosci. 34, 51-60 (2011).
- Garden, D. L. F., Dodson, P. D., O'Donnell, C., White, M. D., Nolan, M. F.
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