감염된 진드기의 hemolymph, 침샘, 그리고 타액의 컬렉션 병원균이 질병을 일으킬 방법 진드기 매개로 공부하는 것이 중요합니다. 이 프로토콜에서는 먹이로부터 hemolymph과 침샘을 수집하는 방법을 보여줍니다 scapularis을 Ixodes nymphs. 우리는 또한 여성에서 타액 수집을 보여줍니다 전 scapularis 성인.
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이 논문에서
요약
초록
진드기는 전세계 찾은 많은 진드기 매개로 질병으로 인간을 괴롭히다하고 있습니다. 진드기 라임 병 및 진드기 매개로 회귀열 (Borrelia SPP.), 록키 마운틴 뇌척수 막염 (Rickettsia rickettsii), ehrlichiosis (Ehrlichia chaffeensis와 E 동등), anaplasmosis (Anaplasma phagocytophilum), 뇌염 (똑딱똑딱의 원인 병원체에 대한 벡터입니다 매개 뇌염 바이러스), babesiosis (Babesia SPP.), 콜로라도 진드기 열 (Coltivirus) 및 tularemia (Francisella tularensis) 1-8. 제대로 호스트로 전송하기 위해서는 이러한 전염성 요원들은 differentially, 유전자 발현을 조절 진드기 단백질과 상호 작용하고, 진드기 3,9-13을 통해 마이 그 레이션. 예를 들어, 라임 병 에이전트, Borrelia burgdorferi는 진드기의 enzootic 사이클 14,15의 향연과 기근 단계로 차등 유전자 발현을 통해 적응. 또한, Ixodes의 진드기와 같은가를 소비bloodmeal Borrelia은 복제 및 midgut에서 그들이 침샘을 여행하고 퇴학 타액 9,16-19있는 호스트로 전송될 hemocoel,로 마이 그 레이션.
진드기는 피드로서 호스트는 일반적으로 강한 hemostatic와 타고난 면역 반응 11,13,20-22로 응답합니다. 이러한 호스트 반응에도 불구하고, 전 진드기의 타액은 3,11,20,21,23 먹이 진드기들을위한 immunomodulatory있는 단백질, lytic 대리인, anticoagulants 및 fibrinolysins가 포함되어 있기 때문에 scapularis는 몇 일 동안 먹을 수 있습니다. 진드기의 타액이나 침샘 추출물 (SGE)에 의해 점령 immunomodulatory 활동이 많은 진드기 매개로 병원균 3,20,24-27의 전염, 확산 및 보급을 촉진. 더 이상 그것이 진드기 먹이 적극적으로 해부하고 진드기의 타액을 수집하는 데 필수적이며 전염성 요원들이 질병을 일으킬 방법 진드기 매개로 이해하기 위해서. 이 비디오 프로토콜에 대한 해부 기술을 보여줍니다hemolymph의 수집 및 적극적 나도 먹이로부터 침샘의 제거 scapularis nymphs 48 후 72 시간 포스트 마우스 배치. 우리는 또한 성인 여성 I.에서 타액 수집을 보여줍니다 scapularis 눈금.
프로토콜
1. 슬라이드 준비 Hemolymph 컬렉션
(동영상 1)
- 부드럽게 표면이 멸균을 위해 10 분간 70 % 에탄올에 나서 5 분 3퍼센트 국소 과산화수소의 동물과 장소에서 적극적으로 먹이 진드기를 제거합니다.
- 자궁 펜은 실란 코팅 현미경 슬라이드에 동그라미를 그려와 자궁 펜 서클 내에서 움직이게 장소.
- 실란 코팅 슬라이드는 현미경 슬라이드에 hemolymph 최고의 준수를 위해 사용됩니다.
- 해부 현미경 (1X 목적, 10X 접안 렌즈, 3.5X 배율)에서 진드기를 볼 수 있습니다.
- 부드럽게 진드기의 다리를 넓히다하고 움직이게 고정하기 위해 집게로 진드기의 dorsum 아래로 밀어.
참고 :이 midgut 또는 주사를 움직이게 방해하고 hemolymph을 오염시킬 수 있기를 움직이게 immobilizing가 너무 열심히 누르지 때.
- 일시 진드기의 다리 또는 다리를 절단일회용 메스 벌금 포인트와 전자 말초 관절. 감염을 확인하려면 hemolymph 통해 불과 1 다리는 절단해야합니다. 슬라이드에 h....
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토론
진드기의 hemolymph, 침샘, 그리고 타액의 컬렉션 진드기 매개로 병원체 전송 연구에 중요하다, 유행, 보급, 확산, 그리고 진드기 및 호스트 6,11-13,20,23,29 모두에서 끈기. 진드기 30,31 해부하는 방법에는 여러 가지가 있습니다. 그러나 침샘을 수집했을 때 제대로 때문에 침샘이 파열이나 진드기의 유골이 안되는 진드기를 해부하는 것이 중요합니다. 침샘들이 midgut 오염을 제거하고 침샘 추출물 (SGE)을 구하는 PBS의 염색법이나 그라운드에 대한 슬라이드로 해결할 수 있습니다 여러 번 씻어해야 진드기 제거하고 나면. SGE는 타액보다 수집하는 것이 더 쉽습니다 그리고 타액과 비슷한 특성을 가지고 있으므로, 그것은 타액 대안으로 사용할 수 있습니다. 그러나, SGE은 진드기의 타액에 존재하지 않습니다 침샘 세포에서 발생하는 추가적인 단백질이 포함되어 있습니다. SGE CAN B의 여분의 단백질뿐만 아니라E 장점이나 수행중인 연구에 따라 단점이 있지만,이 연구는 SG.......
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공개 사항
우리는 공개 할게 없다.
감사의 글
저자는 벡터 매개로 질환 동물 리소스 지점 부문 감사드립니다, 특히 안드레아 피터슨, 리사 Massoudi, Verna 오브라이언, 그리고 생쥐와 토끼들의 관심과 유지 보수를위한 존 Liddell. 우리는 또한이 원고 향한 그들의 공헌에 대해 에이미 Ullmann, 테레사 러셀, 그리고 바바라 J. 존슨 감사드립니다. 마지막으로, 우리는이 원고의 촬영과 관련된 모든 위법를 찍는 동안 그래픽 삽화와 주디 Lavelle를 생산 CDC에서 커뮤니케이 션을위한 준회원 이사의 사무실에 Alissa Eckert을 인정하고 싶습니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약 | 회사 | 카탈로그 번호 | |
| 과산화수소 | 어부 | H312-500 | |
| 에탄올 | Acros | 61509-5000 | |
| PBS | 보스턴 Bioproducts | BM-2205 | |
| 뒤몽 파인 포셉 (3C) | 어부 | NC9906085 | |
| 실란 처리 현미경 슬라이드 | Bioworld | 42763007-1 | |
| 자궁 펜 | Bioworld | 21750008-1 | |
| 슈퍼 서리 플러스 현미경 슬라이드 | 어부 | 12-550-18 | |
| Pilocarpine | 시그마 | P6503-5G | |
| 테아제 억제제 칵테일 | 시그마 | P2714 | |
| # 11 메스 일회용 | 깃털 | 2975 # 11 | |
| 독성 모델링 점토 | 피셔 | S17307 | |
| 모세관 튜브 | 체이스 과학적 유리, INC | 40A502 |
참고문헌
- Quach, K. A., Boctor, F. N., Elston, D. M. What's eating you? Hyalomma ticks. Cutis. 87, 165-167 (2011).
- Graham, J., Stockley, K., Goldman, R. D. Tick-borne illnesses: a CME update. Pediatr. Emerg. Care. 27, 141-147 (2011).
- Nuttall, P. A., Paesen, G. C., Lawrie, C. H., Wang, H.
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