Schistosoma mansoni 달걀은 T 도우미 유형 2 (Th2) 면역 반응, 기생충 감염의 특징, 천식과 알레르기 염증의 강력한 stimulators 있습니다. 이 프로토콜은 S.을 활용 CD4 Th2 시토킨 유도된 염증성 계란 주위에 폐 granuloma 형성을 특징으로 폐에 반응, eosinophilia와 대식 세포 대안 활성화를 생성하는 mansoni 계란 분사.
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이 논문에서
요약
초록
Schistosoma의 기생충은 전세계 약 2억명 1 감염 혈액 flukes입니다. Schistosoma, 간 섬유증 및 splenomegaly 포함한 심각한 병리,과 만성 감염에 오히려 기생충 자체가 2보다 기생충 달걀에 대한 면역 반응 때문에 발생합니다. 기생충 알은 IL-4의 생산, IL-5 및 IL-13, macrophages의 대안 활성화 및 호산구의 채용 특징으로 Th2 반응을 유도. 여기서는 기생충 특정 폐에 Th2 시토킨 반응 및 배수 림프절, 계란을 둘러싼 폐 granulomas의 형성과기도 염증을 검사하기위한 모델로 Schistosoma mansoni 달걀의 주입을 설명합니다.
intraperitoneal sensitization과 정맥 도전, S. 따라 mansoni 달걀은 그들이 폐 실질 조직 내에 갇혀있다 폐의 동맥을 통해 폐로 이송된다lymphocytes, 호산구 및 또는 활성화 macrophages 3-6로 구성되어 granulomas에 의해. 야생마 - 폐포 공간에서 granuloma 형성, 염증과 연관된, 배수 림프절과 CD4의 확장은 T 세포 활성을 관찰할 수있다. 여기서 우리가 세부 사항, 감염된 간은 (7에서 변경)에서 Schistosoma mansoni 달걀을 분리 쥐를 sensitizing과 도전, 그리고 분석을위한 기관 (야생마 - 폐포 세척 (BAL), 폐 및 배수 림프절)를 복구하는 프로토콜. 우리는 또한 대표 histologic 및 추가 immunologic 분석을위한 immunologic 데이터 및 제안을 포함합니다.
전반적으로,이 방법은 생체내 모델에서이 기생충 감염, fibrotic 질환, 알레르기 염증과 천식을 포함한 Th2 염증 질환의 연구에 광범위하게 적용하는 폐 안에 기생충 유발 immunologic 응답을 조사합니다. 일반의 연구에 대해이 모델의 장점폐에서 전자이 염증은 폐에 유력한 Th2 염증 반응의 재현성 및 배수 림프절, 계란을 둘러싼 granulomas의 histologic 심사에 의한 염증의 평가의 용이성, 그리고 기생충의 장기 보관의 가능성을 포함 계란.
프로토콜
1. Schistosoma mansoni 달걀을 정화
- Schistosoma 수명주기 8 전염성 무대 schistosome cercariae와 스위스 웹스터 쥐를 감염. 양자 택일로, NIAID Schistosomiasis 리소스 센터 (에서 schistosome에 감염된 생쥐를 얻을 http://www.schisto-resource.org/~~V ). 그 시간을 포인트로, 계란은 간장에 존재하며 아래 설명에 따라 (그림을 참조하십시오. 1) 복구할 수, 감염 다음 6-7주 위해 생쥐를 남겨주세요.
- CO 2와 쥐를 안락사시켜야하고, 70 % 에탄올로 젖었어. 뒷면에 마우스를 놓습니다. 피부와 기본 복막 버려야하는 무딘 집게와 가위를 사용하십시오. ribcage 및 격막 아래에있는 소비세 간,.
- 잘게 간은를 말하다 및 collagenase / dispase (0.5 밀리그램 / ML), 페니실린 (100 U / ML)과 PBS의 스트렙토 마이신 (100 μg / ml) 쇼핑 구성되어 소화 혼합물의 간 당 20 ML을 추가합니다.....
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토론
여기에 2를 입력 폐 염증을 유발해서 Schistosoma mansoni 달걀을 고용 모델이 설명되어 있습니다. 이 모델의 특징 특징은 강력한 Th2 면역 반응,기도 염증과 폐의 granuloma 형성을 포함합니다. 이러한 매개 변수가 CD4 Th2 세포 반응 11 의존 때문에, 이것은 Th2 세포 반응에 대한 단백질의 특정 또는 혈통 고유의 삭제 효과를 조사하기위한 유용한 모델입니다. 여기에 설치 했어요는 항원에 특정한 Th2 크린 시토킨의 부량,기도의 세포 침투의 분석 및 폐동맥 granulomas의 크기를 포함합니다. 측정할 수있는 추가 매개 변수는 계란 유발 섬유증 12. 이것은 혈관,기도, 그리고 granuloma 내의 (6에 표시된 것처럼) 주변에 발생 콜라겐 증착의 시각화을 허용 Masson의 trichrome와 달걀 주입 폐 섹션을 더럽히는 것으로 측정됩니다.
비록이 protoc마셨다는 .......
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공개 사항
관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.
감사의 글
이 작품은 건강 (NIH) AI091759과 Crohn의와 미국의 윌리엄과 셀비 모델이란 가족 재단 연구 수상 (MN까지)의 대장염 재단의 국립 연구소에 의해 지원되었다. Schistosome에 감염된 생쥐는 NIAID Schistosome 리소스 센터 (NIAID 계약 N01 A130026)가 제공되었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약 | 크기 / 설명 | 회사 | # 카탈로그 |
| Collagenase / Dispase | 500 MG | 로슈 응용 과학 | 11 097 113 001 |
| 비교 Quik Hema 3 청바지 | 짐 | 피셔 과학 (주) LLC | 122-911 |
| DMEM | 액체 | Gibco | 11,965 |
| 팔콘 50mL | 짐 | 매 | 352,070 |
| Intramedic PE 관 | 0.58 mm | Becton 디킨슨과 (주) | 427,410 |
| Isoflurane | 250 ML | 원장 동물 건강 | 52600405 |
| 케타민을 | 100 MG / ML | 포트 닷지, 동물 건강 | N / A |
| Mannose 수용체 항체 | 비오틴 | AbD Serotec | MCA2235B |
| 메탈릭 스트레이너 | 표준 부엌 스트레이너 | 목표 | Laurentiis |
| Paraformaldehyde | 16% | 전자 Microsc. 과학 | 15,710 |
| 페니실린 / 스트렙토 마이신 | 100x | Gibco | 15,070 |
| Percoll | 1 리터 | GE 헬스케어 Biosciences | 17 0,891 01 |
| RELMα 항체 | 50 μg | Peprotech | 500-P214 |
| 외과 스레드 | 2.0 USP 100 yds | 외과 특산품 주식 회사 | SP118 |
| 주사기 바늘 | 23g, 4분의 3 인치 | BD Vacutainer 연구소. 메드. | 305,143 |
| 미국 표준 시험 체 | 150 μm의, 0.0059 " | WS 타일러 주식 회사 | ASTME-11, 사양. 번호 100 |
| Xylazine | 20 MG / ML | 집사 | N / A |
참고문헌
- World Health Organization. Prevention and control of schistosomiasis and soil-transmitted helminthiasis: report of a WHO expert committee. WHO Technical Report Series 912. , Geneva. (2002).
- Pearce, E. J., MacDonald, A. S. The immunobiology of schistosomiasis. Nat. Rev. Immunol. 2, 499-511 (2002).
- Sandler, N. G.
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재인쇄 및 허가
