Azoxymethane (AOM)과 Dextran의 황산 나트륨 (DSS)와 모델링 대장염 - 관련 암

요약

우리는 빠르게 친 염증성 에이전트 dextran 황산 나트륨 (DSS)의 세주기에 의해 다음과 일관되게 인간의 대장염에서 본 것과 morphologic와 분자 유사성과 마우스에 결장 종양을 생성 genotoxic 에이전트 azoxymethane (AOM)의 어느 관리의 프로토콜을 보여줍니다 암을 관련.

초록

이러한 Crohn의 질병 (CD) 또는 궤양 성 대장염 (UC)와 같은 염증성 장 질환이있는 개인 (IBD)는 건강한 개인을 통해 대장 암 (CRC)을 개발의 증가 위험이 있습니다. 이 위험은 널리 colonic 참여와 오랜 UC와 개인 30 %로 높이 누적 발병률과 질병의 기간 및 범위에 비례한다. IBD와 대장염 관련 암 (CAC)에서 ¹ Colonic 형성 이상은 결과로 개발 믿어 아르 이러한 세포는 만성 염증성 시토 킨 환경에 목욕을하는 동안 ^2. 자연과 대장염 - 관련 암이되는 adenocarcinomas의 질을 공유하는 동안 상피 세포 손상 및 수리의 반복주기를, 하부 분자 이벤트의 순서는 서로 다른 것으로되어 있습니다. ^3이 차이는 CAC의 특정 동물 모델의 필요성을 주장하고있다.

여러 마우스 모델은 현재 CAC의 연구를 위해 존재합니다. Dextran 황산 sodi음 ... (DSS), colonic 상피에 직접 독성 효과 요원이 만성 염증 상태를 만드는 여러 사이클의 생쥐에 물을 마시는으로 시행 할 수 있습니다. 충분한 기간으로,이 마우스 중 일부는 종양을 개발합니다. 프로 발암 설정으로 시행하는 경우 ⁴ 종양 개발이이 모델에 크게된다. 이러한 tumorigenesis 경로에서 유전자 변이가있는 마우스 (APC, p53의, Msh2)뿐만 아니라, 마우스 genotoxic 대리인 (azoxymethane [AOM], 1,2 - dimethylhydrazine [DMH]) ^5.이 사전 처리를 포함

대장염 관련 암에 대한 모델로 AOM과 DSS의 결합은 재현성, 효력, 낮은 가격, 사용의 용이성에 대한 인기를 얻었습니다. 사람들이 공유 메커니즘을 가지고 있지만, AOM은 DMH보다 솔루션에 더 강력한 안정적으로 발견되었습니다. 다른 모델에서 종양이 개발은 일반적으로 필요로하는 동안 몇 개월은 AOM과 함께 주입하고 이후 DSS로 치료 쥐에 충분한 종양을 개발S 7~10주로 조금. ^{6, 7} 마지막으로, AOM과 DSS는 특정 tumorigenic 변형에 크로스 번식없이 유전 배경 마우스 (유전자 변형 등을 끊는)로 관리 할 수 있습니다. 여기, 우리는 10 주 동안 DSS 세 7 일 사이클 뒤에 AOM의 단일 주사를 이용하여 마우스에 염증 기반 colonic tumorigenesis에 대한 프로토콜을 보여줍니다. 이 모델은 밀접하게 인간의 CAC에서 발생하는 사람들을 닮은 조직 학적 및 분자 변화에 종양을 유도하고이 병에 oncogenesis과 화학 예방의 연구에 매우 중요한 모델을 제공합니다. ⁸

프로토콜

1. 대장염 - 관련 암 유도

1. 섹스 케이지와 실험 및 제어 그룹에 사용되는 나이와 일치하는 6~8주 오래된 쥐를 따로 설정합니다. 마우스는 개별적으로 꼬리 표시 또는 귀 클립으로 표시 할 수 있습니다.
2. 일 0, 기록 기준 가중치를 켜고 10 AOM 작업 솔루션의 MG / kg (dH2O의 10 MG / ML 주식 솔루션에서 희석 등장 생리 1 MG / ML은 -20 ℃ 일 C에서 보관)와 각 마우스 intraperitoneally (IP)을 주입 . 경험을 바탕으로,이 용량은 7-14 밀리그램 / kg 및 / 사이에 조정 또는 초기 실험에서 반복 할 수 있습니다.

주의 : AOM은 불안정 genotoxic 요원과 함께 MSDS에 따라 신중하게 처리해야합니다. Dilutions는 화학 후드에서 준비 얼음에 유지하고, 기관 특정 프로토콜에 따라 폐기해야합니다.

3. 0.22 μm의 셀룰로스 아세테이트 F 조를 통해 (2.5 g/100 ML) 증류수와 패스의 DSS 솔루션을 2.5 %을진공의 ilter. 이 용량은 마우스 변형 및 환경에 따라 1-3.5 % 사이에서 조정할 수 있습니다. 최대 1 주일에 한 번 준비 DSS 솔루션은 ....

토론

신속하고 효율적으로 모델을 인간 대장염 - 관련 암 AOM과 DSS있는 마우스의 치료. 대장염 - 관련 암에 기여 요소를 물려 전할 수있는에 관한 가설을 쉽게 유전 공학 마우스와 함께 공부 할 수 있습니다. ^13, 또는 ^16, 대장염 - 관련 암의 pharmacologic 목표의 효과가 야생 형 생쥐를 고용하여 공부 할 수 있습니다.

이 모델은 높은 염증의 설정에 결장 종양 개발의 연구에 관심을 가진 자에 의해 가치를하는 동안, 제한이 존재합니다. 이 모델의 생쥐에서 관찰 질병의 정도는 상당히 마우스 변형 및 주택 조건 (caging, 먹이, microbiota 등)에 따라 달라질 수 있습니다. 스즈키 동부 표준시. 알은 Balb / C 마우스는 (종양 발생과 다양성을 감소 위해) / 129에서 혼자 DSS와 AOM를 포함 C57BL/6N, C3H/HeN 및 DBA/2N 마우스. ¹⁷ 실험 뒤에 AOM / DSS에 가.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
시약의 이름	회사	카탈로그 번호	코멘트
C57BL/6J 마우스	잭슨 연구소	000664
Azoxymethane (AOM)	시그마 알드리치	A5486-100MG	증권 솔루션 : 희석 10 0.5으로 -20 ° C에서 보관 할 증류수에 MG / ML - 1 ML의 aliquots. 작업 솔루션 : 등장 1 MG / ML (0.9 %) 생리에 주식을 희석
Dextran의 황산 나트륨 (DSS)	TdB 컨설팅	DB001	MW 40 kDa (다른 출처 36-50 kDa의 준비는 허용, 같은 많은 하나의 실험을 위해 사용되어야합니다) 6
Coloviewminiendoscopic 시스템	칼 Storz	복수	장비 및 설치에 대한 자세한 설명은 베이커 외 있습니다. 참조하십시오. 11
TPP 신속한 FILTERMAX 500 ML 병 - 필터, 0.22 μm PES	중서부 과학	TP99500	모든 표준 조직 문화 필터는 허용합니다
에틸 알콜 200 증명 ASC / USP	Pharmaco-AAPER (또는 다른)	11ACS200	증류수에 70 %를 희석
Isoflurane, USP	버틀러 동물 건강 공급	4029405	거즈 나 마취에 배어있는 작은 천으로 유리 병에서 개최 마우스
18G 스트레이트 Gavage 니들	Braintree 과학	N-008
인산염은 식염 (PBS)를 버퍼	시그마올드리치	P5493	증류수에 1X (0.01 M)으로 희석
감기 트레이 (조직 테크 II 감기 플레이트)	피셔 과학	NC9491941	-20 ° C에서 저장
ImageJ 소프트웨어	NIH (무료 다운로드)		http://rsbweb.nih.gov/ij/
포름 알데히드 (37 %)	피셔 과학	F79-500	PBS에서 10 %로 희석
BD Bacto 한천	피셔 과학	DF0140-01-0	증류수에 2 %의 솔루션을 생성 할 열판을 사용하여
Miltex 눈 드레싱 포셉	MedPlus 주식회사	18-780
Miltex 아이 가위	MedPlus 주식회사	18-1430	구부러진 포인트 여는 동안 콜론의 손상을 방지한다.
Alcian 블루 8GX (분말)	시그마 알드리치	A5268	100 ML 3퍼센트 아세트산 (3 ML 빙하 아세트산 + 97 ML 증류수)에 1g 분말을 추가
intradermal 베벨 주사 바늘에 첨부 된 26 G X 팔분의 삼 1 ML 투베르쿨린 주사기	BD	305946	AOM의 분사에 대한