혈관 질병의 연구에 대한 마우스의 Orthotopic 대동맥 이식

요약

우리는 마우스의 복부 대동맥의 한 부분이 단지 allogeneic 또는 syngeneic받는 사람의 신장 동맥 아래에 orthotopically 이식되는 기술을 설명합니다. 이 기술은 균일 한 크기의 큰 동맥의 이식이 유리한 것으로 간주되는 연구에 유용 할 수 있습니다.

초록

마우스의 문합을 포함하는 혈관 절차는 일반적으로 어렵고 개별 외과 의사의 기술에 크게 의존 할 것으로 생각됩니다. 이 대부분 사실이지만, 이러한 절차의 어려움을 줄이고 재현성을 향상시킬 수 있습니다 중요한 원칙에는 여러가지가 있습니다. Orthotopic 대동맥 이식은 두 엔드 - 투 - 엔드 문합을 포함하기 때문에 이러한 원칙을 배울 수있는 훌륭한 절차이지만, 일관된 성공을위한 좋은 suturing 기술과 선박의 취급이 필요합니다. 이 절차는받는 사람의 기본 대동맥의 분단 다음 기증자 동물의 복부 대동맥의 길이의 조달과 함께 시작합니다. 조달 대동맥은 다음받는 사람 대동맥의 구분 끝 사이에 위치하여 엔드 - 투 - 엔드 문합을 사용하는 곳으로 봉합되어 있습니다. 이 목표를 성공적으로 농도의 높은 수준, 좋은 도구, 침착, 그리고 감사를 필요로 수행하는 방법을 쉽게마우스 vasculature는 혈전증의 결과로 손상 될 수 있습니다. 이러한 중요한 원칙을 배우는 것은 작은 설치류에 미세을 배우고 대부분의 초보자의 시간을 차지하고이야. 이 프로토콜 전반에 걸쳐, 우리는 다음과 같은 중요한 사항을 참조하십시오. 이 모델은 다른 실험 시스템 ^1-8의 다양한 혈관 질환을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 여기에 표시된 맥락에서,이 가장 많이 후 이식 혈관 질환, 내막 증식증이 allograft 내에서 발생하는 고체 장기 이식의 일반적인 장기 합병증의 연구에 사용됩니다. 모델의 주요 장점은 양적 morphometric 분석을 용이하게하고 이식 혈관은 추가 제어 ^구 역할을 할 수있는 내생 선박에 인접 자리 잡고 있다는 것입니다. 여기에 표시된 기술은 가장 자주 18~25g 무게 마우스에 사용됩니다. 우리는 C57BL/6J, BALB / CJ, 그리고 C3H/HeJ의 변종을 사용하여 우리의 경험의 대부분을 축적하고 있습니다.

프로토콜

1. Presurgical 준비

1. 수술 절차,주의 깊게 수행 방법에 상관없이, 중요한 스트레스의 결과. 이러한 스트레스의 영향을 최소화하고 매장량을 극대화하기 위해 동물을 사용 ^10,11 전에 최소 72 시간 동안 동식물 사육장에서 유지되어야한다.
2. 수술 도구, 거즈, 그리고 면봉은 살균해야합니다. 이 악기 터치 봉합이나 수술 분야의 만 팁을 제공하는 멸균 장갑을 사용할 필요가 없습니다.
3. 지혈를 들어, 클램핑 압력이 최소가 필요하다고 필수적입니다. 과도한 압력이나 거친 취급으로 인해 혈관에 손상은 24 시간 이내에 엉덩이 - 다리 마비, 장 국소 빈혈, 죽음의 결과로, 혈전증을 일으킬 것입니다. 우리는 더 이상 2보다 GM / cm ^2의 압력으로 클램프를 사용하여 문제를 제거하는 것으로 확인되었습니다. 이 클램프는 표 1에 설명되어 있습니다. 클램프 압력은 높은 품질의 외과 instrumen에 의한 클램프의 사양에 표시되어 있습니다t 제조업체. 우리는 저렴한 클램프 또는 일회용 클램프가 보편적 너무 많은 압력을 발휘하는 것으로 확인되었습니다.
4. 담보 선박뿐만 아니라 복부 대동맥의 상대적 위치와 아래 대정맥 (IVC)의 위치는 변형에 따라 달라집니다. 당신....

결과

그림 1은 대동맥 이식을 보여줍니다. 흰색 화살표는 봉합 라인을 나타냅니다. 특허 수술이 볼 수 펄스를 표시합니다. 그림 2는받는 사람의 생존은 56일 기간 동안 다음에 한에서 전형적인 실험을 나타냅니다. 한 그룹은 BALB / C 대동맥으로 이식 (C57BL / 6 X FVB) 야생 - 타입받는 마우스로 구성. "KO"지정 다른 그룹은, 24 시간 이내에 이식의 혈전증에 결과 헴 oxygenase-1, 표현의 결함 수신자 (C57BL / 6 X FVB)로 구성되어 있습니다. 특히, 모든받는 사람의 죽음이 결과는 그림과 같이. 그림 3 쇼 에코 IVC와 일반 동물과 이식받는 사람의 복부 대동맥의 측정. 이식은 특허 및 비 이식 대동맥 모양과 비슷합니다.

토론

마우스가 잘 immunogenetically ^9,12,13 정의되어 있으며, 원하는 경우들이 쉽게 특정 유전자의 표현을 변경하기 위해 조작 할 수 있기 때문에 대동맥 이식의 마우스 모델은 많은 장점을 제공합니다. 도입에 명시된 바와 같이 마우스에 혈관 수술 때문에 선박의 크기 대부분의 모델보다 더 어렵습니다. 같은 대동맥 등의 큰 동맥, 보통 내부 직경 100-200 μm보다 더하지 않습니다, 때문에 이러한 혈관을 조작하는 것은 기술과 민첩성 ^8,14 상당한 양의가 필요합니다. 단지 시스템을 구현하기 시작 자에 의해이 수술에서 관찰하는 가장 일반적인 합병증은 일반적으로 거친 핸들링 또는 클램핑의 intima의 부상으로 인한 혈전증으로 인한, 엉덩이 - 다리 마비입니다. 미세을위한 도구가 적절한 판매 회사가 판매 클램프의 대부분은 25 GM / cm ^2보다 일반적으로 더 큰 압력으로, 마우스에 사용되는 너무 많은 압력을 만들 수 있습니다. CIA에서우리가 사용하는 의원은.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
항목	회사	카탈로그 번호
혈관 클램프	정밀 과학 도구	00396-01 (크기 B-1)
뒤몽 집게	정밀 과학 도구	11293-00
10-0은 microsuture을 Needled	AROSurgical	TK-107038
스트레이트 가위	Roboz 외과 악기 (주)	RS-5620
낮은 온도 cauterizer	비버 - Visitec 국제	8441000
자체 유지 트렉터	세계 정밀 계측기	14,240