인간 치과 펄프의 줄기 세포의 분리, 특성화 및 비교 차별화 두 가지 방법을 사용하여 영구 치아에서 파생

요약

방법 중 하나를 사용하여 인간의 치과 펄프의 줄기 세포 (hDPSCs)의 분리 및 특성 설명 효소 분해 (DPSC-ED) 또는 직접 가지 (DPSC-OG). 그런 다음 체외에서 비교 차별화.

서론

줄기 세포는 멀티 효력과 자기 갱신 ¹⁵ 두명의 놀라운 기능을 가지고 clonogenic 세포입니다. 다른 replicative의 potencies 모든 줄기 세포 중에서 출생 후의 줄기 세포와 같은 치과 줄기 세포 때문에 자신의 접근성, 소성 및 기타 성인 줄기 세포 ^16에 비해 높은 proliferative 능력의 최근 관심을 모으고있다. 특질 상, 중간 엽 줄기 세포와 유사한, 치과 펄프의 줄기 세포는 여러 차별화를 mesenchyme로 용량 및 / 또는 체외 및 생체에서 모두 비 mesenchyme lineages을 가지고 자기편 clonogenic 세포입니다. ^1-8,17,18 DPSCs에 의해 식별됩니다 자신의 부정적인 조혈 항원의 표현 (예를 들어, CD45, CD34, CD14) 및 CD90의 긍정적 인 표현, CD29, CD73, CD105, CD44 및 STRO-1. ^19,20

최소 통증 및 병적 쉽게 얻을 가능성이 valu로 인간 DPSCs을MSCS의 수 출처는 골수 중간 엽 줄기 세포 ^21로 보통 소스에 비해. 일반적으로 DPSCs는 두 가지 방법, 즉 펄프 조직 expla....

프로토콜

1. 효소 솔루션 및 확산 매체 (PM)를 준비

1. Collagenase 종류 나 솔루션을 만들기 : collagenase 유형 I (12 MG / ML)을 무게 0.2 μm의 주사기 필터를 사용하여 1 ML PBS와 필터에 용해. 그런 다음 15 ML 튜브를 삽입하고 필요 할 때까지 -20 ° C에 보관하십시오.
2. dispase 솔루션을 확인합니다 dispase을 펴라 (16 MG / ML) 1 ML PBS 및 필터는 0.2 μm의 주사기 필터를 사용하여 분해. 그런 다음 15 ML 튜브를 삽입하고 필요한 ° C까지 4에 보관하십시오.
3. 효소 솔루션을 확인하십시오 : 2 ML 멸균 PBS 100 MG / ML 페니실린, 100 MG / ML의 스트렙토 마이신을 포함하는으로 한 ML collagenase 유형 I 솔루션 (12 MG / ML) 1 ML dispase 솔루션을 (16 MG / ML)를 추가합니다. 최종 볼륨의 dispase과 Collagenase I의 총 농도는 receptively 4 MG / ML, 3 MG / ML,해야합니다. 그런 다음, 네 15 ML 튜브, 각 포함 1 ML 효소 솔루션에에 나누어지는이 볼륨입니다. 각 관은 한 펄....

결과

1. 효소 분해 (DPSC-ED)에 의해 획득 된 DPSCs는 하루에 10 15,18 (그림 1)에서 여기에 표시됩니다. 분리 한 후 거의 3-5일에 형성 시작 식민지가.
2. 능가 DPSCs (DPSC-OG)는 5 일, 10, 13 & 18 일 그림 2에 표시됩니다. 세포가 병렬 심는 후 약 5 일까지 주문에 의해 펄프 조직에서 병으로 마이그레이션하기 시작 섬유 아세포과 같은.
3. 두 방법을 사용하여 통로 3 DPSCs은 그림 3에 표시됩니다. DPSCs 두 종류의 같은 크기 및 형태에 거의이었다.
4. DPSC-ED 및 DPSC-OG (그림 4)의 결과를 Immunophenotyping.이 결과는 CD44, CD73, CD105 및 CD90과 같은 중간 엽 줄기 세포의 마커의 존재, 그리고 CD34, CD45 및 CD11b와 같은 조혈 및 내피 마커의 부재를 기재 . CD105 및 CD146.......

토론

이 프로토콜은 두 가지 방법, 효소 분해 및 펄프 조직 explants에서 줄기 세포를 직접 가지를 사용하여 치과 펄프에서 hDPSCs의 절연 및 특성화 과정을 설명합니다. 또한, odontoblasts에 이러한 세포의 체외 차별화에 정량 알리자린 레드 S 검정 & QPCR에 의해 평가되었다.

인간의 치아에서 펄프 조직을 분리에 대한 기존 프로토콜은 이러한 플라이어 (뼈 포셉) 9 근절 바늘 ^29, 그레이시 퀴렛 ^30, 치과 균열 (fissure)의 burs ⁴ 등의 낮은 수준을 고려하면서 이러한 방법은 시간이 많이 소요 아르 등 다양한 악기를 사용했다 지속적으로 물을 추가하여 펄프의 과열. 그러나, 현재의 기술로, 치과 다이아몬드 디스크를 한 단계 과정에서 최소 오염과 이빨을 줄일 수있는 빠른 방법입니다 펄프 조직의 격리에 사용되며, 절단 과정에서 펄프의 과열을 최소화 할 수 있습니다. 또한,.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
시약의 이름	회사	카탈로그 또는 로트. 수	코멘트 (선택 사항)
α-가상	GIBCO	11900-073
Collagenase 유형 I	시그마 - 알드리치	C0130-100MG
Dispase	GIBCO	17105-041
페니실린 / 스트렙토 마이신	GIBCO	15140-122
Amphotericin B	GIBCO	15290-018
태아 소 혈청 정의 (FBS)	HyClone	SH30070.03
2 인산 L-아스코르브 산	시그마	A8960-5G
L-글루타민	GIBCO	25030-024
Dexamethasone	시그마	D4902
β-글리세롤 인산 나트륨 소금 하이드레이트, BioUltra	시그마	G9422-100G
인산 칼륨 일 염기의	시그마 - 알드리치	P5655
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